圈养野生动物肠球菌耐药分子流行病学研究

摘要

目的:调查圈养野生动物的动物源性(动物园、熊猫馆)、环境源性(动物园里的水样、土样)以及人源性(动物园的饲养员、兽医及普通人群)高水平耐氨基糖苷类肠球菌、耐万古霉素肠球菌的耐药性,并对分离出的耐药菌株进行耐药表型、基因型检测及同源性研究,为指导兽医临床合理用药及控制耐药性传播提供理论依据。
　　 方法:采用琼脂平板筛选法(ADSP法)筛选高水平庆大霉素肠球菌(HLGRE)、高水平耐链霉素肠球菌(HLSRE)、耐万古霉素肠球菌(VRE);根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法测定耐药菌株对6种抗菌药物的耐药性;用PCR法对分离出的不同来源的高水平耐氨基糖苷类肠球菌进行菌种的鉴定及耐庆大霉素肠球菌主要耐药基因的检测;采用多重PCR法对不同来源的耐万古霉素肠球菌在进行耐药基因检测的同时进行种水平的鉴定;用重复基因外回文序列-聚合酶链反应(REP-PCR)对筛选出的部分高水平耐庆大霉素肠球、耐万古霉素肠球菌进行基因分型及同源性分析。
　　 结果:
　　 (1)从动物园(圈养野生动物、水样和土样、饲养员、兽医)、熊猫馆(熊猫)及普通人群共283个样本中筛选出165株HLGRE、39株VIE。从动物园(部分圈养野生动物、饲养员、兽医)、熊猫馆(熊猫)及普通人群共74份样本中筛选出38株HLSRE。不同来源的分离率不同:其中动物源性高水平耐庆大霉素肠球菌、高水平耐链霉素肠球菌的分离率最高,分别占65.92％、64.86％,但普通人群的高水平耐庆大霉素肠球菌、高水平耐链霉素肠球菌检出率仅分别为23.81％、19.05％,而耐万古霉素肠球菌的分离率存在较大的差异,为0％~37.5％,且均为中介菌。药敏实验结果显示,不同来源的高水平耐氨基糖苷类肠球菌、耐万古霉素肠球菌均以红霉素和土霉素的耐药率最高,以氨苄西林的耐药率最低。其中高水平耐氨基糖苷类肠球菌中,屎肠球菌的耐药性高于粪肠球菌。
　　 (2)PCR法检测高水平耐庆大霉素耐药基因:不同来源的165株高水平耐庆大霉素肠球菌中,aac(6')-Ie-aph(2