青藏高原草地野生双孢蘑菇遗传多样性及主要性状评价

摘要

本研究对青藏高原所属的四川省石渠县、炉霍县、德格县、稻城县、若尔盖县、红原县以及青海省泽库县青、刚察县,甘肃省祁连县、碌曲县和西藏拉萨市、那曲县、羊八井、当雄县等14个地区的野生双孢蘑菇资源就行了调查。对采集的野生双孢蘑菇菌株结合栽培种进行了遗传差异分析旨在了解青藏高原野生双孢蘑菇遗传多样性,同时进行了菌丝生长速度以及对不同地区部分菌株进行了出菇试验,旨在丰富双孢蘑菇的育种材料。
　　 对不同采集地的个别菌株的rDNA18s区域进行ITS4-ITS5扩增,测序结果通过在GenBank中已知的蘑菇属的种进行Blast序列比对得到同源序列较高的ITS序列,并以蘑菇属其它种作为参照构建系统发育树。结果表明:AGQL811测序菌株以99％的置信度与Agaricus campestris聚为一类,其他测序菌株以99％的置信度与Agaricus bisporus聚为一类。
　　 采用简单序列重复区间扩增多态性(Inter-simpie sequence repeat,ISSR)技术,选用9个引物对青藏高原的79个野生蘑菇菌株和10个对照菌株进行遗传多样性分析,构建了遗传相关聚类图。结果表明:遗传相似系数变异范围为0.24-1,在相似系数为0.46时,89个菌株聚为3个群。第一类有83个菌株,10株对照聚在了第一类中,第二类有4个菌株,第三类有2个菌株。79个野生菌株和10个对照菌株未出现在遗传背景上完全相同的菌株,说明野生菌株在DNA水平上具有比较显著的遗传变异,显示出丰富的遗传多样性。
　　 结合ISSR分析以及形态特征鉴定出第一类的野生菌株为野生双孢蘑菇(Agaricus bisporus),第二类的野生菌株为野生蘑菇(Agaricus campestris)。
　　 对不同地区部分野生菌株菌丝生长速度进行试验,结果表明野生菌株生长速度比对照菌株的生长速度慢。
　　 对不同地区部分菌株进行了出菇试验,结果表明野生蘑菇菌株的颜色以棕色为主,产量较之对照栽培种低并且差异明显。

目录

文摘

英文文摘

1.综述

1.1 野生双孢蘑菇概况

1.2 遗传多样性研究方法

1.2.1 形态学标记

1.2.2 细胞学标记

1.2.3 同工酶标记

1.2.4 DNA分子标记

1.2.5 DNA分子标记在双孢蘑菇遗传多样性研究中的应用

1.3 ITS序列分析在种类鉴定中的研究

1.4 双孢蘑菇栽培与特性

1.4.1 双孢蘑菇在我国的栽培发展史

1.4.2 双孢蘑菇的营养价值

1.4.3 双孢蘑菇的营养生理特性

1.4.4 双孢蘑菇的生物学特性

1.5 本研究的目的和意义

2.材料与方法

2.1 野生蘑菇菌种鉴定

2.1.1 试验菌种

2.1.2 供试培养基和所需试剂配制

2.1.3 试验菌株DNA提取

2.1.4 ITS-PCR扩增

2.2 青藏高原草地野生双孢蘑菇ISSR遗传分析

2.2.1 供试菌株

2.2.2 供试培养基

2.2.3 引物和试剂

2.2.4DNA的提取

2.2.5ISSR-PCR扩增

2.2.6数据分析

2.3 菌丝形态特征与生长特性

2.3.1 供试菌株

2.3.2 菌丝形态特征与生长特性试验方法

2.4 出菇试验

2.4.1 出菇试验材料

2.4.2山菇试验设计与方法

3.结果与分析

3.1 野生蘑菇菌种鉴定结果

3.1.1 野生双孢蘑菇菌株ITS-PCR鉴定结果

3.1.2野生双孢蘑菇菌株ITS序列分析构建系统发育树结果

3.2 青藏高原草地野生双孢蘑菇ISSR遗传分析结果与分析

3.2.1 ISSR-PCR电泳结果

3.2.2 基于ISSR的遗传相似系数聚类分析

3.3 菌丝形态特征与生长特性试验结果

3.4 出菇试验结果与分析

3.4.1 产量统计结果及分析

3.4.2 农艺性状结果集分析

4.讨论

4.1 ITS序列分析的优缺点

4.2 野生双孢蘑菇遗传多样性研究为选取双孢蘑菇杂交育种亲本提供依据

4.3 环境因素对子实体的影响

5.结论

5.1 青藏高原草地野生双孢蘑菇有着广泛的分布

5.2 青藏高原草地野生双孢蘑菇遗传多样性丰富

5.3 双孢蘑菇野生种与栽培种差异明显

参考文献

附录

致谢