美洛昔康对犬软骨细胞影响的试验研究

摘要

骨关节炎（osteoarthritis）（又称骨关节病）是老年人中最常见的关节疾病。骨关节炎的发生最终来源于软骨细胞的变化，因此研究软骨疾病的基础是对软骨细胞的研究。美洛昔康作为一种新型的非甾体抗炎药，在兽医临床上应用广泛，很少报道有关于其对正常犬软骨细胞的研究，本研究主要是探索美洛昔康对犬正常软骨细胞的生理影响，期望对临床上安全使用提供一定的帮助。
　　试验内容主要包括原代软骨细胞培养及鉴定，MTT、流式细胞术、RT-PCR。首先通过从犬膝关节取材，采用不完全消化法从组织中分离获取软骨细胞，进行软骨细胞原代培养，并通过甲苯胺蓝染色、细胞免疫化学鉴定体外培养的软骨细胞仍保持软骨细胞特性。根据美洛昔康的血浆有效浓度，选取5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L三个试验剂量，并设计对照组0μmol/L，刺激软骨细胞24h和48h。用MTT比色法检测不同剂量美洛昔康对犬正常软骨细胞的增殖影响，并用流式细胞术检测软骨细胞的凋亡率和周期，RT-PCR检测相关细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、p53mRNA的表达，期望从基因水平探究不同剂量美洛昔康对犬软骨细胞生理活动的影响。
　　试验结果表明：（1）MTT：0μmol/L，5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L剂量美洛昔康分别刺激犬正常软骨细胞24h和48h，对软骨细胞的增殖无显著差异影响。比较同剂量在24h和48h的刺激效果，也并无显著差异，证明5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L剂量美洛昔康对犬正常软骨细胞的增殖基本无影响。
　　（2）流式检测细胞凋亡率表明不同美洛昔康对犬正常软骨细胞的凋亡并无显著性影响，检测周期表明，随着刺激时间的增长，细胞G1、G2、S期都发生显著变化，G1期细胞比例显著减小，G2期、S期细胞比例增大具有统计学意义。
　　（3）RT-PCR检测相关细胞凋亡因子Bax、Bcl-2、p53mRNA的表达，5μmol/L和10μmol/L剂量组Bcl-2/Bax比率上调，差异显著具有统计学意义，p53基因表达与对照组有显著差异。
　　结论：5μmol/L，10μmol/L，20μmol/L剂量美洛昔康分别刺激犬正常软骨细胞24h和48h，对犬正常软骨细胞无促凋亡作用，可能与Bcl-2/Bax比率上调有关，为临床安全使用美洛昔康提供了一定的依据。

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第一部分：文献综述

1骨关节炎的概述

2软骨细胞的特征

3美洛昔康的研究进展

4本课题的研究目的和意义

第二部分：试验研究

引言

1试验材料

2试验方法

3结果与分析

4讨论与总结

试验二 美洛昔康对软骨细胞活力的影响

引言

1试验材料

2试验方法

3数据处理

4结果与分析

5分析与讨论

第三部分：结论、创新点和展望

一、结论

二、创新点

三、展望

参考文献

致谢