海螵蛸对胃粘膜损伤保护及其凝血、止血功效研究

摘要

海螵蛸，又名乌贼骨，为传统中药材，具有抗胃溃疡、凝血、止血、成骨等生物活性。但是，在乌贼的加工过程中，海螵蛸通常被丢弃，造成资源浪费。如果能根据海螵蛸自身生物活性开发成新型药物或保健食品，不仅能变废为宝，而且更能产生良好的经济效益。本试验以海螵蛸为主要原料，采用先进的分析手段对海螵蛸的结构进行检测，验证海螵蛸胃粘膜损伤保护作用、凝血、止血活性，并研制出治疗胃溃疡的片剂。主要研究内容如下：
　　1、海螵蛸物质结构及其主要成分的分析研究。采用环境扫描电镜、红外光谱、X射线衍射、电感耦合等离子体质谱4种手段对海螵蛸的结构进行检测并分析，初步探究其结构与部分生物活性的关系。经电镜扫描发现，海螵蛸腹面疏松层整体呈房架结构，由疏松多孔的壁龛样的网格结构形成。而粉碎后的海螵蛸，其网格结构完全被破坏。但是，经动物实验证实：粉碎后海螵蛸粉末仍具有保护胃粘膜损伤、凝血、止血的活性，这说明此网格结构与其凝血、止血、保护胃粘膜损伤活性关系不大。由红外扫描和X射线衍射分析可知：海螵蛸含有文石结构的碳酸钙，完整海螵蛸与其腹层相比化学成分基本相同，但文石含量不同。此外，通过电感耦合等离子体质谱检测，海螵蛸含70种无机元素，其中含大量的Ca，少量的Na、Sr、Fe、P、K、Mg，微量的Si、Zn、Cu、Al、Br、Ba、B、Mn、Ni等。
　　2、海螵蛸对乙醇诱导的急性胃粘膜损伤的保护作用研究。在Wistar大鼠体内营造乙醇诱导的急性胃粘膜损伤模型，以不同剂量的海螵蛸对模型Wistar大鼠进行灌胃给药，测定胃粘膜的损伤面积、损伤指数、损伤抑制率、胃液体积、酸度、MDA、GSH、T-SOD、PEG2、MPO等指标，比较各组对乙醇诱导的急性胃粘膜损伤的保护效果。结果显示：海螵蛸具有保护乙醇诱导的胃粘膜损伤的作用。其作用机制可能是：海螵蛸中的钙与胃酸产生中和作用，提高胃液pH值，减轻其对胃粘膜侵蚀作用。同时，可调节胃粘膜组织中NO含量，加强胃粘膜的屏障功能；促进胃液、胃组织、血清中PGE2的合成，增强黏膜组织的抵抗能力，加速溃疡的愈合。此外，提高SOD的活力，清除氧自由基和减轻脂质过氧化反应，降低胃组织和血清中MDA的含量，减轻对胃粘膜细胞的损伤，不同程度的降低胃组织中MPO的活性，参与调节胃粘膜损伤的炎症反应，可能是其保护胃粘膜的另一机制。
　　3、海螵蛸凝血作用效果研究。通过分析海螵蛸悬浮液对不同实验组小鼠出血时间和凝血时间的影响，验证其凝血效果，并对可能的凝血机制进行探讨，为新型海螵蛸药物的开发提供理论依据。结果表明，在250 g/L剂量下，海螵蛸的出血时间和凝血时间分别比生理盐水对照组缩短11.45 min和1.38 min。海螵蛸各剂量组均能明显缩短小鼠的出血时间和凝血时间，且不同程度脱钙后的海螵蛸固形物组的出血时间和凝血时间与生理盐水对照组相比均差异极显著。这表明，不论海螵蛸中钙含量多寡，均具有凝血活性，且未脱钙海螵蛸的凝血效果最好，对剂量也有一定的依赖性。而单纯的碳酸钙却不具有凝血活性。海螵蛸能明显缩短凝血时间，提示海螵蛸凝血活性可能与各种凝血因子的含量及它们的功能有关。海螵蛸能明显缩短出血时间，这提示海螵蛸可能与血小板数胃粘膜损伤量、血小板的功能、毛细血管功能、组织因子数量及组织收缩力等有关。
　　4、海螵蛸体外止血效果研究。通过小鼠试验，比较海螵蛸与其他常见的止血材料的止血性能。以豚鼠模型，评价海螵蛸粉末对豚鼠背部健康皮肤和破损皮肤产生刺激的反应，探究其致敏性。通过小鼠股动脉横切面止血试验，证实了超微粉碎海螵蛸止血时间最短为（1.21±0.11）min，止血速度短于云南白药和淀粉，止血效果理想。经豚鼠背部健康皮肤和破损皮肤的单次接触试验证明，海螵蛸粉末对皮肤无刺激性、无致敏性、安全性强。因此，海螵蛸具有良好的止血效果和无致敏性。
　　5、海螵蛸片剂的制备工艺研究。通过单因素实验及正交试验优化影响片剂质量的因素条件，获得最佳的片剂配方：麦芽糊精1.0 g、交联羧甲基纤维素钠（CCNa）添加量3％、硬脂酸镁添加量0.2%。按此配方，得到的片剂外观光洁，片重差异、崩解时间均符合药典要求且重现性好。

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第一章 绪 论

1.1 海螵蛸的形态

1.2 海螵蛸的结构

1.3 海螵蛸的化学成分

1.4 海螵蛸生物活性

1.5 海螵蛸应用现状

1.6 本论文的研究意义及研究内容

第二章 海螵蛸结构分析与主要化学成分测定

2.1 材料与仪器

2.2 试验方法

2.3 结果与讨论

2.4 小结

第三章 海螵蛸对乙醇诱导的大鼠急性胃粘膜损伤保护作用研究

3.1 材料与仪器

3.2 试验方法

3.3 结果与讨论

3.4 小结

第四章 海螵蛸凝血作用效果研究

4.1 材料与方法

4.2 结果与讨论

4.3 小结

第五章 海螵蛸体外止血效果研究

5.1 材料与仪器

5.2 试验方法

5.3 结果与讨论

5.4 小结

第六章 正交设计优化海螵蛸片剂的制备工艺

6.1 材料与方法

6.2 结果与分析

6.3 小结

结论

参考文献

致谢