海带多糖的提取及生物活性研究

摘要

海带，褐藻门海带属，我国大规模养殖的经济型海藻。福建省是我国海带主产区，福建霞浦、连江、莆田均盛产海带。海带作为“药食同源”类海藻其药学功效在诸多药学典籍中记载。现代科学研究表明，多糖是海带主要的功效成分之一，具有抗氧化、抗动脉粥样硬化、抗凝血、抗肿瘤、免疫调节等生物学活性。本文立足福建优势海带资源，对海带活性多糖进行分离纯化，并研究其组成及生物学活性。
　　本课题采用水提醇沉法获得海带粗多糖WPS，得糖率为2.5％。采用离子交换法粗多糖WPS进行分离纯化，得到粗组分WPS-1，进一步采用凝胶柱层析法纯化后得到多糖纯化组分WPS-1-2。经琼脂糖凝胶电泳法分离，鉴定WPS-1-2为分子量分布均一的纯化多糖。HPLC检测其分子量为282 KDa。化学组成分析结果表明，海带多糖纯化组分WPS-1-2是硫酸酯化多糖，其多糖含量为92.3%，硫酸根含量为10.4%。采用RP-HPLC法检测单糖组成，结果表明海带多糖纯化组分WPS-1-2主要由岩藻糖、半乳糖和甘露糖组成，其摩尔比为3.97:3.83:1。
　　生物活性实验结果表明，海带多糖具有显著抗氧化活性。经分离纯化后海带多糖纯化组分WPS-1-2总抗氧化能力提高，是其粗多糖总抗氧化力的2倍。此外，多糖纯化组分 WPS-1-2对超氧阴离子和羟自由基均有显著清除活性。当多糖纯化组分浓度为1 mg/mL时，其对超氧阴离子清除率为95%，与相同浓度下Vitamin C对超氧阴离子清除率相当。当多糖纯化组分浓度达到3 mg/mL时，对羟自由基清除率达到93%，高于相同浓度下Vitamin C对羟自由基清除率。
　　海带多糖纯化组分 WPS-1-2可抑制过氧化氢诱导的血管平滑肌细胞增殖，其最大增值抑制率为73%，且呈量效相关性。细胞形态观察结果表明，海带多糖纯化组分 WPS-1-2通过诱导细胞凋亡抑制血管平滑肌细胞增殖。明胶酶谱分析结果显示，海带多糖纯化组分WPS-1-2对血管平滑肌细胞内MMPs蛋白酶活性具有抑制作用，显著抑制与血管平滑肌细胞迁移活性相关的MMP2蛋白酶活性。丙二醛测定结果表明，与过氧化氢模型组相比，海带多糖纯化组分 WPS-1-2有效降低血管平滑肌细胞内丙二醛含量，这与海带多糖纯化组分具有显著自由基清除活性相关。
　　因此，海带多糖纯化组分 WPS-1-2对血管平滑肌细胞增殖抑制机制与其诱导细胞凋亡以及缓解过氧化氢对细胞增殖诱导作用有关。

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第一章 引言

1.1海带研究概况

1.2海带多糖分类和理化性质

1.3 海带多糖构效关系研究

1.4海带多糖的提取

1.5海带多糖纯化

1.6海带多糖药理活性

1.7海带多糖利用情况与存在问题

1.8课题研究的目的及意义

第二章 海带多糖的提取、分离纯化及结构表征

2.1 实验材料与仪器

2.2 实验方法

2.3 实验结果与讨论

2.4 小结

第三章 海带多糖抗氧化活性研究

3.1 实验材料与仪器

3.2 实验方法

3.3 实验结果与讨论

3.4 小结

第四章 海带多糖对H2O2诱导VSMC增殖的影响

4.1 实验材料与仪器

4.2 实验方法

4.3 实验结果与讨论

4.4 小结

第五章 总结与展望

5.1全文总结

5.2展望

参考文献