漳平市杜鹃花产业调查与VIGS技术体系初步构建

摘要

本研究通过文献检索、实地走访和电话咨询等方式进行漳平市杜鹃花产业现状分析，从中发现杜鹃产业存在的问题，最后提出相应对策，旨在促进漳平市杜鹃花产业健康持续发展。目前漳平市杜鹃花产业存在品种引种为主，缺乏自主培育品种问题，同时杜鹃花多以杂交育种为主，所需时间长，品种更新缓慢，而VIG S技术作为一种简单、快速、高通量的基因功能分析方法，还未应用到杜鹃中，因此本研究开展了杜鹃花VI GS技术的体系构建，进行杜鹃花观赏性相关基因的功能验证，利于漳平市杜鹃花新品种的培育，从而促进杜鹃产业发展。
　　本文的主要研究结果如下：
　　1.对漳平市杜鹃花产业的生产情况、商品情况、发展优势和经营情况进行调查，结果如下：（1）龙岩作为福建省杜鹃花产业的主产区，2015年种植面积达400 hm2，占福建省87％；（2）漳平市杜鹃花产业规模虽然有所缩小,甚至在2013年出现产值下滑18%的情况，但是近两年漳平市专业化生产水平逐步成熟、生产技术不断提高，经济效益不断提高，产值呈现上升趋势（3）搜集到的漳平市杜鹃花产业中约100个杜鹃花品种，从中发现的杜鹃商品花色主要为红色和紫色，花形特征为大花和重瓣；盆花和苗木为主要的商品类型，盆景杜鹃是新兴的商品类型（4）漳平市杜鹃花产业由于土地与租金问题，主要以个体农户为经营模式；销售模式大部分为传统的批发，开店，进驻商场的方式，互联销售模式逐渐兴起。
　　2.漳平市杜鹃花产业发展中存在的问题有：（1）商品化品种依赖引种，缺乏自主知识产权品种；（2）产品类型和产品应用创新能力不足；（3）产业运营有待完善，花企缺乏综合竞争力。
　　3.漳平市杜鹃花产业发展的优势条包括：适宜的气候环境和独特的区位交通优势，悠久的杜鹃花栽培历史，政府部门和相关政策的支持，丰富的种质资源，充沛的劳动力，以及良好的花卉市场发展潜力。
　　4.通过对漳平市杜鹃花产业存在的问题和其优势条件的分析，提出了一系列有助于漳平市杜鹃花产业发展的对策：（1）重视新品种研发，提升品种创新能力；（2）丰富产品类型，拓宽产品应用；（3）加强产学研合作，提升花企综合竞争力；（4）提升产业现代化水平，优化产业运营。
　　5．基于烟草脆裂病毒载体，进行杜鹃 VIGS病毒载体的构建。成功克隆了杜鹃392 bp的PDS基因片段、472bp的CHS基因片段、400bp的DFR基因片段、372bp的RDR2A基因片段和350bp的MADS基因片段。同时构建了杜鹃VIGS病毒载体包括，VIGS-PDS载体、VIGS-CHS载体、VIGS-DFR载体、VIGS-MADS载体、VIGS-RDR2A载体。
　　6.杜鹃VIGS技术体系的建立与优化。以杜鹃嫩叶和成熟叶为实验材料，设置不同处理的侵染液浓度 OD600值分别为1.0、1.5和2.0，采用注射法将含有VIGS-PDS载体的农杆菌瞬时转化杜鹃植株。通过对侵染后叶片的表型观察和统计，发现杜鹃嫩叶和成熟叶均出现 PDS基因表达受抑制的表型。初步表明采用pTRV病毒载体可以用于杜鹃植株的基因沉默。并且在综合分析了不同侵染液浓度（OD600值）对杜鹃叶片PDS基因沉默的效果，以及对叶片生长发育的影响，确定了较适宜的侵染液OD600值为1.0。
　　7.杜鹃花器官VIGS技术的构建与优化。设置OD600值为1.0和2.0两种侵染液浓度，采用注射法和涂抹法处理杜鹃的花苞和半开放的花苞的基部，以及开放花的花瓣。对侵染后的花器官进行表型观察和统计，发现开放花均未出现预期的CHS基因、DFR基因、MADS基因和RDR2基因表达受抑制的表型。但通过比较分析各组实验处理结果，本文对杜鹃花器官VI GS体系的构建提出了一些值得参考的建议。

目录

声明

英文缩略词表

第一章 绪论

1 国内外杜鹃花研究进展

1.1 国外研究进展

1.2 国内研究进展

2 杜鹃花产业概况

2.1 比利时杜鹃市场概况

2.2 丹东杜鹃市场概况

2.3 高山杜鹃市场概况

3.1 VIGS简介

3.2 VIGS作用机理

3.3 VIGS作用效率的影响因素

3.4 VIGS的应用及展望

3.5 本研究相关基因简介

4.1 研究目的

4.2 研究的意义

5 技术路线

5.1 调查技术路线

5.2 VIGS技术路线

第二章 漳平市杜鹃花产业调查

1 调查方案

1.1 调查时间及地点

1.2 调查方法

1.3 调查内容

2.1漳平市杜鹃花产业规模

2.2 漳平市杜鹃花商品调查

2.3 漳平市杜鹃花产业经营情况调查

2.4 漳平市杜鹃花产业发展优势

3 漳平市杜鹃花产业存在问题

3.1商品化品种依赖引种，缺乏自主知识产权品种

3.2产品类型和产品应用创新能力不足，

3.3产业经营有待完善，花企缺乏综合竞争力

4.1重视新品种研发，提升品种创新能力

4.2 丰富产品类型，拓宽产品应用

4.3 加强产学研合作，提升花企综合竞争力

4.4 提升产业现代化水平，优化产业运营

第三章 杜鹃VIGS技术体系构建

1.1植物材料

1.2菌株及质粒

1.3工具酶及主要生化试剂

1.4主要仪器设备

2实验方法

2.1 目的基因序列的获取与测序

2.2 VIGS病毒载体的构建

2.3 植株的侵染

3结果与分析

3.1目的基因片段的获取

3.2 VIGS病毒载体构建的检验

3.3表型观察结果

4讨论

第四章 总结

参考文献

致谢