声明
第一章 前言
1.1 嗜水气单胞菌的危害
1.2 Hfq蛋白的结构功能与国内外研究进展
1.2.1 Hfq蛋白的发现
1.2.2 Hfq蛋白的结构
1.2.3 Hfq蛋白的功能
1.2.4 Hfq蛋白的研究意义
1.3 Hfq2蛋白的结构功能与国内外研究进展
1.3.1 Hfq2蛋白的发现
1.3.2 炭疽芽孢杆菌的Hfq同源蛋白的研究进展
1.3.3 伯克霍尔德氏菌属Hfq同源蛋白的研究进展
1.3.4 嗜水气单胞菌Hfq同源蛋白的研究进展
1.4 本论文主要研究内容及其研究意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株与质粒
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂来源
2.1.4 主要仪器
2.1.5 常用试验试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 不同细菌Hfq蛋白同源性比较
2.2.2 嗜水气单胞菌pET-32a-Hfq2高表达菌株的构建
2.2.3 Hfq2蛋白的纯化与蛋白浓度测定
2.2.4 Hfq2鼠抗的制备
2.2.5 嗜水气单胞菌?hfq2突变株的构建
2.2.6 嗜水气单胞菌?hfq2突变株生长速率的测定
2.2.7 运动性
2.2.8 胞外蛋白酶活性与溶血活性的测定
2.2.9 生物膜的测定
2.2.10 体外应激实验
2.2.11 药物敏感实验
2.2.12 细菌全蛋白的提取
2.2.13质谱鉴定
2.2.14 Western Boltting分析
2.2.15 荧光定量PCR
第三章 结果与分析
3.1 不同细菌Hfq蛋白同源性分析
3.2 hfq2基因克隆表达与纯化
3.2.1 原核表达载体构建及鉴定
3.2.2 重组工程菌诱导表达产物的SDS-PAGE分析
3.2.3 Hfq2蛋白纯化产物的SDS-PAGE分析
3.2.4 讨论
3.3.1 嗜水气单胞菌?hfq2突变株的构建
3.3.2Δhfq2对嗜水气单胞菌生长情况的影响
3.3.3Δhfq2对嗜水气单胞菌运动性的影响
3.3.5Δhfq2对嗜水气单胞菌胞外蛋白酶活性与溶血性的影响
3.3.6Δhfq2对嗜水气单胞菌生物膜的影响
3.3.7Δhfq2对嗜水气单胞菌在氧化、高低温、酸碱性环境和高渗透压下的耐受性
3.3.8Δhfq2对嗜水气单胞菌一些药物的敏感性分析
3.3.9 讨论
3.4 浮游状态下野生菌与?hfq2突变株定量蛋白质组学研究
3.4.1 浮游状态下野生菌与突变株的定量蛋白质组学比较
3.4.2 差异蛋白功能分类及注释分析
3.4.3 差异蛋白的KEGG途径分析
3.4.4 蛋白质组学数据验证
3.4.5 讨论
3.5 生物膜状态下野生菌与?hfq2 突变株定量蛋白质组学研究
3.5.1 生物膜状态下野生菌与突变株的定量蛋白质组学比较
3.5.2 生物信息学分析
3.5.3 蛋白质组学验证
3.5.4 讨论
第四章 总结与展望
4.1 总结
4.2 展望
参考文献
硕士研究生期间发表的文章
致谢
