ATP对α-晶体蛋白分子伴侣功能及结构的影响

摘要

目的：探讨Q一晶体蛋白分子伴侣功能的作用机制，旨在进一步研究白内障的病因，为白内障的药物治疗提供理论基础和实验依据。 方法：l、以柠檬酸合酶(citratesynthase，CS)作为靶蛋白，先与盐酸胍孵育m使之变性，再加入不同浓度的α-晶体蛋白(0nM、50nM、150nM、300nM)，通过分光光度计(~=360nm)检测6min内各组相对光散射值的变化情况。 2、CS与盐酸胍孵育lh使之变性后，加入不同浓度的α-晶体蛋白(0nM、150nM、300nM、600nM)，通过分光光度计(λ=412nm)检测2h内CS活性的变化情况。 3、同时孵育CS、盐酸胍及不同浓度的α-晶体蛋白(0vM、1vM、2vM)，通过分光光度计(λ=412nm)检测30min内各组残留CS的活性。 4、在加入不同浓度α-晶体蛋白的同时加入3mMATP，重复上述1～3步实验。 5、将O．1mg／mlQ一晶体蛋白与不同浓度的ATP(0mM、1mM、3mM、5mM)在37℃温育2h，采用荧光分光光度计检测α-晶体蛋白在发射波长316～400nm范围内的荧光发射光谱。 结果：1、随着α-晶体蛋白浓度的升高，相对光散射值明显减小，各组之间比较差异有显著性。 2、不论α-晶体蛋白浓度的高低，各组柠檬酸合酶活性均几乎全部丧失，没有显著性差异。 3、将CS、盐酸胍和α-晶体蛋白三者同时孵育，各组的残留柠檬酸合酶活性均随时间的延长而下降。在6min及12min时1vM仅．晶体蛋白组与2rrmα-晶体蛋白组残留柠檬酸合酶活性相比无显著性差异，但均明显高于0rrmα-晶体蛋白组；在18min、24min、30min时残留柠檬酸合酶的活性随着α-晶体蛋白浓度的升高而增强，各组之间比较差异有显著性。 4、在同一α-晶体蛋白浓度下，有ATP组的相对光散射值显著小于无ATP组。 5、不同浓度α-晶体蛋白存在时，加入ATP，各组柠檬酸合酶活性几乎不变，没有显著性差异。 6、在同一α-晶体蛋白浓度下，有ATP组的残留柠檬酸合酶的活性明显高于无ATP组，差异有显著性。 7、随着ATP浓度的升高，α-晶体蛋白的内在色氨酸荧光强度逐渐降低，差异有显著性。 结论：l、α-晶体蛋白能抑制盐酸胍诱导的CS的凝集和变性，并具有浓度依赖性，ATP加强了这一抑制作用。 2、α-晶体蛋白能保护盐酸胍诱导的CS的失活，也具有浓度依赖性，ATP加强了这一保护作用。 3、α-晶体蛋白及ATP不能再激活、重新折叠变性的CS。 4、ATP能够影响Q．晶体蛋白的分子构象。

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结论

参考文献

文献综述：α-晶体蛋白分子伴侣功能的研究进展

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