HepG2在阻断肝再生增强因子后MHCⅠ、MHCⅡ/DR、B7-1、B7-2的表达差异研究

摘要

目的：在我们前期研究工作中，发现肝再生增强因子在肝癌细胞中高表达，并且对体外肿瘤细胞膜抗原激活的单核细胞具有抑制作用。因此推测hALR作为一种生长因子以及免疫抑制因子在肝癌的自主性生长以及肝癌逃避机体免疫监视中发挥了重要的作用。本研究拟通过核酸水平阻断内源性产生的人肝再生增强因子(human augmenter oflivet regeneration，hALR)后，观察肿瘤细胞表面MHC I、HLA-DR、B7-1、B7-2分子的表达在阻断前后有无变化，以了解ALR其免疫调控作用的环节是否通过MHC、B7。为进一步研究hALR在肝癌细胞免疫逃逸中的作用做初步探索。 方法：本文利用能够产生发夹结构的小干扰RNA(small interferingRNA.siRNA)的载体质粒，将其转染HepG2细胞，阻断hALR的表达后，观察体外培养的HepG2细胞表达MHC I、HLA-DR、B7-1、B7-2有无变化。实验分为HepG2对照组，转染阳性SiRNA组，转染阴性对照SiRNA组，转染脂质体空质粒对照组，采用免疫组化，RT-PCR，WESTERN BLOT印迹法，流式细胞术检测HepG2细胞表达MHC I、DR、CD80、CD86的水平。所有结果采用凝胶成像自动分析系统处理，所得的计量资料以均数士标准差表示，采用单因素方差分析(ONE-WAY-ANOVA)和Q检验，P<0.05表示统计学差异，P<0.01表示显著性差异。所有资料应用SPSS 12.0统计软件进行分析。 结果：免疫组化的检测结果：转染阳性SiRNA组，转染阴性对照SiRNA组，MHC I、DR、CD80、CD86两组间表达无差异(P>0.05)。RT-PCR的检测结果：转染阳性SiRNA组，转染阴性对照SiRNA组，MHC I、DR、CD80、CD86两组间表达差别不明显。WESTERN检测结果：转染阳性SiRNA组，转染阴性对照SiRNA．组，MHC I、DR、CD80、CD86两组间表达差别不明显。流式细胞术，检测MHC I、DR、CD80、CD86阳性组和阴性对照组无明显差异。HepG2对照组比转染阳性SiRNA组，在免疫组化，MHC I、DR表达量高，而流式方法检测DR、CD80、CD86转染后其表达率明显高于HepG2细胞组和转染脂质体空质粒对照组。 结论：在核酸水平阻断肝再生增强因子的表达，不影响HepG2表达MHC I、DR、CD80、CD86。提示ALR参与肿瘤细胞的免疫逃逸不通过MHC I、DR、CD80、CD86。

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摘要

前言

1材料与方法

2实验结果

2.1质粒的鉴定

2.2细胞免疫化学检测MHCⅠ、MHCⅡ、CD80、CD86表达

2.3RT-PCR检测MHCⅠ、MHCⅡ、CD80、CD86表达

2.4WESTERN-BLOT检测MHCⅠ、MHCⅡ、CD80、CD86表达结果

2.5FACS检测MHCⅠ、MHCⅡ、CD80、CD86表达

3讨论

结论

参考文献

文献综述 肝窦内皮细胞与免疫耐受

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文