氨基葡甘露聚糖在小鼠体内抗呼吸道合胞病毒的研究

摘要

目的：在小鼠体内观察AGM的抗hRSV病毒活性。 方法：(1)AGM和KGM的制备；(2)人呼吸道合胞病毒(hRSV)培养传代，空斑单位形成实验检测hRSV病毒滴度以选择合适的病毒感染滴度；(3)建立hRSV感染的BALB/c小鼠模型，随机分为实验组和对照组，每组54只小鼠，根据析因设计方法，将实验组各小鼠按单次给予AGM的剂量不同，分为2.5μmol、0.25μmol、0.025μmol高、中、低三组，每组根据两次给药间隔时间(8小时，12小时，24小时)又分为3组，共9个小组，每组6只小鼠。用RSV液给小鼠滴鼻以感染小鼠。接种病毒后12小时首次给药，6滴/分钟，鼻内滴入。接种病毒后72h处死小鼠，取肺组织以备用于检测。KGM对照组分组方法和给药方法与实验组相同。(4)观察小鼠一般情况的变化；(5)RT-PCR方法检测AGM及KGM对肺组织中RSV F mRNA水平的影响；(6)对肺组织行HE染色和ICAM-1水平的免疫组化法检测，分析肺组织炎症状况。 结果：(1)成功制备AGM和KGM，浓度分别为25μmol/L；(2)所测病毒滴度为3.95×10<'7>pFU/ml。感染剂量为100ul 10<'6.pFU/ml(3)成功建立hRSV感染的BALB/c小鼠模型，并按照实验方法分组。(4)实验组大部分小鼠一般情况如毛发、体重、生活习性等没有明显改变，对照组有16只小鼠活动度明显减弱，其中2只小鼠3天内死亡。(5)RT-PCR结果示：实验组中，各相同间隔时间组的小鼠肺组织RSV FmRNA水平随着AGM剂量的增加而降低，各相同剂量组随着间隔时间的延长而升高，差异有显著性(P<0.05)；对照组RSV F mRNA水平随给予KGM剂量和给予间隔时间的不同而产生的差异无显著性(P>0.05)。(6)小鼠肺组织}玎巳染色显示，实验组肺泡间隔以及支气管间质内炎症细胞浸润较少，而对照组炎症细胞多，部分肺组织肺泡间隔断裂较重，肺泡中血液渗出较多。免疫组化结果显示，实验组肺泡上皮细胞，支气管内皮细胞以及炎症细胞的细胞膜和胞浆中ICAM-1的表达量较对照组明显减少，实验组中，各相同间隔时间组小鼠肺组织ICAM-1表达量随着AGM剂量的增加而减少，各相同剂量组的ICAM-1表达量随着间隔时间的延长而增多，差异有显著性(P<0.05)；对照组各小组ICAM-1表达量的差异无显著性(P>0.05)。 结论：AGM在小鼠体内具有抗呼吸道合胞病毒的作用，通过改变单次给药剂量和给药间隔时间均说明其作用具有剂量依赖性。相比而言，KGM没有明显的抗病毒作用，提示氨基化与AGM的抗病毒作用有明确的关联。

目录

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

摘要

前言

1实验材料

2实验方法

3结果

4讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述 抗呼吸道合胞病毒的免疫预防

致谢

攻读硕士期间发表的论文