抗2型登革病毒M蛋白和NS1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

目的：利用2型登革病毒New Guinea C株(NGC株)重组质粒克隆表达重组M蛋白和NS1蛋白，制备抗2型登革病毒M蛋白和NS1蛋白的单克隆抗体，并对其生物学特性进行了鉴定，为下一步制备快速检测登革病毒感染的胶体金试纸条奠定基础。 方法：诱导表达含DV2 prm、ns1基因的原核表达重组载体pET-32a(+)/prM、pET-32a(+)/M、pQE-30/NS1，并且采用了Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白，以SDS-PAGE进行初步鉴定，并以兔抗登革病毒免疫血清鉴定其免疫活性。以重组蛋白免疫Balb/c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗登革病毒重组蛋白的McAb，采用间接ELISA方法和Western blot进行McAb特异性鉴定；同时采用间接ELISA方法鉴定McAb的lg亚类、效价及亲和力进行分析。 结果：重组蛋白pET-32a(+)M、pQE-30/NS1以上清和包涵体表达，用兔抗登革病毒血清检测发现上清中蛋白抗原活性强。利用Ni2+-NTA树脂亲和层析方法，从上清中纯化蛋白获得成功。通过杂交瘤技术成功获得3株可分泌特异性McAb的杂交瘤细胞Ⅲ1.A6，Ⅲ3D2和Ⅲ4C3。其中Ⅲ1A6，Ⅲ4C3的抗体亚类均为IgG1；Ⅲ3D2的抗体亚类为IgG2a。细胞培养上清的效价分别为1:106， 1：105和1:106:3株单抗的亲和常数均在107以上。Westerrl bolt检测证明3株杂交瘤细胞所分泌的McAb特异性良好。 结论：成功地制备出抗M蛋白的2株McAb和抗NSl蛋白的1株McAb，为进一步建立快速特异检测登革病毒感染的实验方法提供了有力的工具。

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摘要

前言

第一部分2型登革病毒prm、ns1基因的扩增，重组质粒构建

前言

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

第二部分2型登革病毒prm，ns1基因在大肠杆菌中的高效表达、纯化

前言

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

第三部分抗M蛋白和NS1蛋白单克隆抗体的制备

前言

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

第四部分抗M蛋白和NS1蛋白单克隆抗体的鉴定

前言

1材料

2方法

3结果

4讨论

5结论

全文总结

参考文献

文献综述 登革病毒的分子生物学检测技术研究进展

致谢

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