阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM逆转作用的实验研究

摘要

目的：（1）建立人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM并研究其耐药特性及生物学特性。（2）研究粉防己碱（Tetrandrine，Tet）对人鼻咽癌耐药细胞株NNE-1/ADM的逆转作用及其可能机制。（3）研究阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞株NNE-1/ADM的逆转作用及其可能机制。 方法：（1）采用逐步递增阿霉素（Adriamycin，ADM）浓度，间歇作用体外诱导法培养建立人鼻咽癌HNE-1耐药细胞模型HNE-1/ADM。MTT法测定HNE-1和HNE-1/ADM细胞株的生长曲线、交叉耐药性和耐药指数；用光镜、电镜检测HNE-1/ADM细胞株形态学变化；流式细胞仪检测人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM细胞周期的变化。（2）采用MTT法测定粉防己碱对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM的逆转作用；流式细胞仪检测粉防己碱对HNE-1/ADM细胞株凋亡作用的影响；免疫组化法和Western blot检测HNE-1/ADM细胞中P-gp、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。（3）采用MTT法测定阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM的逆转作用；流式细胞仪检测阿霉素-粉防己碱脂质体对HNE-1/ADM细胞凋亡作用的影响；免疫组化法和Western blot检测HNE-1/ADM细胞中P-gp、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。 结果：（1）历时4月建立了人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM，该细胞株耐药性能稳定，耐药指数为10.913倍；并且HNE-1/ADM细胞株与5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-FU）、顺铂（Cisplatin，DDP）、长春新碱（Vincristine，VCR）等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性。HNE-1/ADM细胞株的细胞形态与亲代细胞HNE-1相比较发生了变化；体外细胞群体倍增时间较亲代细胞延长11.86h；细胞周期分析结果显示HNE-1/ADM耐药细胞株S期与G0/G1期细胞减少、G2/M期细胞增多。（2）粉防己碱能逆转HNE-1/ADM对抗肿瘤药物ADM的耐药性，使其耐药指数从10.913降至3.130；1.0μg/ml Tet不能诱导HNE-1/ADM细胞凋亡，但其可以提高ADM对耐药细胞的凋亡作用；免疫组化法和Western blot检测HNE-1/ADM细胞株中P-gp、Bcl-2、Bax的蛋白表达发现，粉防己碱作用于HNE-1/ADM细胞后，P-gp、Bcl-2的蛋白表达降低，Bax的蛋白表达增强。（3）阿霉素-粉防己碱脂质体与Tet相比能更好地逆转HNE-1/ADM细胞耐药作用，使其耐药指数从10.913降至1.348，逆转倍数为7倍；流式细胞仪检测显示ADM-Tet脂质体对HNE-1/ADM细胞凋亡率高于ADM+Tet对HNE-1/ADM细胞的凋亡率（p<0.05）；ADM-Tet脂质体可显著降低耐药细胞中P-gp和Bcl-2的蛋白表达（p<0.05），促进Bax的蛋白表达（p<0.05）。 结论：（1）建立了人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM，该细胞株具有耐药细胞株的耐药特性和生物学特性，是研究人鼻咽癌耐药机制及筛选逆转剂较理想的细胞模型。（2）粉防己碱能逆转HNE-1/ADM对抗肿瘤药物ADM的耐药性，能提高ADM对耐药细胞的凋亡作用，其机制可能与降低耐药蛋白P-gp的表达，降低调控凋亡相关蛋白Bcl-2表达和增强Bax的表达有关。（3）与粉防己碱对人鼻咽癌耐药细胞HNE-1/ADM逆转作用相比较，阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞HNE-1/ADM具有更好的逆转作用，能提高HNE-1/ADM的细胞凋亡率，其机制可能与降低耐药蛋白P-gp的表达以及调控相关蛋白Bax和Bcl-2的表达有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

前 言

第一部分人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM建立及其生物学特性鉴定

1材料与方法

2结 果

3讨论

第二部分粉防己碱对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM的多药耐药逆转作用及其可能机制研究

1材料与方法

2结 果

3讨论

第三部分阿霉素-粉防己碱脂质体对人鼻咽癌耐药细胞株HNE-1/ADM逆转作用研究

1材料与方法

2结 果

3讨论

全文总结

参考文献

图版

文献综述:粉防己碱的抗肿瘤作用的研究进展

致 谢

硕士期间发表论文