茶多酚对酒精性肝病过氧化物酶体增殖物激活受体α及核因子-κB的调节作用

摘要

目的：通过观察茶多酚对酒精性肝病（ALD）动物及细胞模型过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）和核因子-κB（NF-κB）的表达及活性的调节作用，探讨茶多酚对酒精性肝病的保护作用及可能机制。 方法： 1.体内实验：30只Wistar大鼠随机分为3组：对照组用普通饲料；模型组在对照组的基础上加用酒精；茶多酚组在模型组的基础上给予茶多酚，7周末处死大鼠。检测各组大鼠血清ALT、AST、MDA水平。常规HE染色光镜观察各组大鼠肝组织基本病理学改变；苏丹Ⅳ染色观察肝组织脂肪变性的情况。RT-PCR测各组大鼠肝组织PPARαmRNA表达；凝胶迁移电泳（EMSA）测各组大鼠肝组织NF-κB活性变化。 2.体外实验：培养人永生化的正常胎肝L02细胞株1天，贴壁后分为5组：对照组常规培养6天；模型组用酒精诱导3天后常规培养3天；用茶多酚不同时间段干预模型组分为：茶A组预先用茶多酚处理3天后再用酒精造模3天；茶B组同时用酒精和茶多酚干预3天后常规培养3天；茶C组用酒精造模3天后再用茶多酚处理3天。以7天为周期传代，处理4周。油红O染色光镜观察各组L02细胞脂滴变化；荧光显微镜观察各组L02细胞ROS荧光着色情况。检测各组L02细胞培养液ALT、AST、GGT、TG含量；细胞内ROS含量。RT-PCR测各组细胞PPARα、NF-κB和IκBmRNA表达；EMSA测各组L02细胞NF-κB活性的变化。 结果： 1.成功建立ALD动物模型。 2.模型组大鼠血清肝脏酶学指标ALT、AST及过氧化脂质降解产物MDA明显高于对照组大鼠，茶多酚组大鼠血清ALT、AST、MDA含量明显低于模型组。 3.模型组大鼠脂肪变性明显，脂变面积大于30％，未见明显的炎细胞浸润及纤维化病变；较模型组，茶多酚组所有大鼠的脂肪变性面积减小、程度减轻。 4.与对照组大鼠比较，模型组PPARαmRNA表达降低，NF-κB活性增强；与模型组大鼠比较，茶多酚组大鼠PPARαmRNA表达升高，NF-κB活性减弱。 5.成功建立酒精性脂肪变L02细胞模型，MTT结果显示在一定浓度范围茶多酚能改善体外L02细胞的ALD损害。 6.与模型组比较，茶A、B、C组脂肪变性面积小、程度轻；活性氧荧光着色暗；ALT、AST、GGT、TG、ROS含量减少。 7.与对照组比较，模型组L02细胞PPARamRNA表达降低，IκBmRNA表达降低，NF-κBmRNA表达升高，NF-κB活性增强；与模型组比较，茶A、B、C组L02细胞PPARαmRNA表达升高，IκBmRNA表达升高，NF-κBmRNA表达降低，NF-κB活性减弱。 结论： 1.氧化应激与脂质过氧化参与了ALD的发生，茶多酚可能通过抗氧化作用改善体内外实验中ALD模型的肝脏损害。 2.茶多酚对ALD的保护作用的分子机制涉及上调PPARα的表达及抑制NF-κB的活化。 3.茶多酚对ALD的发生发展有一定的干预作用，而且预先、同时或者延后使用茶多酚干预体外ALD模型均能减轻ALD的病变，对肝细胞有一定的保护功效。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

前 言

第一部分茶多酚对酒精性肝病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α及核因子-κB的调节作用

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

第二部分茶多酚对酒精性脂肪变L02细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α及核因子-κB的调节作用

前言

1材料和方法

2结果

3讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述过氧化物酶体增殖物激活受体α及核因子κB在酒精性肝病发病机制中的作用

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文