RNA干扰核糖核酸酶抑制因子表达对膀胱癌BIU-87细胞侵袭和转移的影响

摘要

目的：构建核糖核酸酶抑制因子（RI）基因siRNA干扰质粒，并检测其对人膀胱癌BIU-87细胞侵袭和转移的影响。 方法：设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体，通过酶切和DNA测序鉴定载体，再转染BIU-87细胞，通过RT-PCR、western blot和免疫细胞化学检测干扰的有效性。观察细胞形态改变，细胞粘附实验、划痕实验和Transwell法测定细胞粘附、迁移和侵袭能力的变化，分析细胞中基质金属基质酶的表达，及用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝结构。 结果：酶切和测序鉴定质粒构建符合实验设计；转入特异性siRNA表达载体后RI蛋白的表达被显著抑制，对照组未发生显著改变；2个干扰实验组的细胞形态堆叠严重，细胞粘附显著降低，迁移和侵袭能力显著增加，基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9显著提高，细胞骨架微丝聚集，细胞伸展出片状伪足。 结论：已成功构建RI基因siRNA干扰质粒，抑制RI基因的表达后引起膀胱癌细胞的一系列特性改变，显著提高了膀胱癌细胞迁移和侵袭能力。结合之前的研究，上调RI表达能抑制肿瘤在体内转移，说明RI可作为抑制肿瘤侵袭和转移的有效靶点。

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英文文摘

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

前言

第一部分RI siRNA干扰重组表达载体的构建与鉴定

1材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2实验结果

2.1 pGenesil-1的单酶切鉴定

2.2重组质粒的DNA测序鉴定

3结论

第二部分RI siRNA真核表达质粒对BIU-87细胞中RI基因表达的抑制

1材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2实验结果

2.2.1转染后荧光观察和稳定细胞株的筛选

2.2.2 RI mRNA表达水平变化

2.2.3 RI蛋白表达水平变化

2.2.4免疫细胞化学分析

3结论

第三部分RI siRNA对BIU-87细胞的黏附、迁移和侵袭等生物学特性的影响

1材料与方法

1.1材料

1.2实验方法

2实验结果

2.1细胞的形态学改变

2.2黏附能力改变

2.3迁移能力改变

2.4侵袭能力改变

2.5基质金属基质酶MMP-2、MMP-9表达变化

2.6细胞骨架微丝的变化

3结论

讨论

参考文献

文献综述 基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9与膀胱肿瘤的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文