超声联合载卡莫司汀脂质微泡治疗大鼠脑胶质瘤的研究

摘要

目的：研究自制载卡莫司汀脂质超声微泡在超声的作用下体外诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞凋亡及抗大鼠脑胶质瘤生长的作用，探讨卡莫司汀超声微泡靶向治疗神经胶质瘤的疗效和可能的生物学机理，为临床应用提供的实验依据。 方法： 1.载卡莫司汀脂质超声造影剂制备及特性的研究：采用机械振荡法制备载卡莫司汀脂质超声造影剂，显微镜下观察并计算其浓度、马尔文测量其粒径大小、分布、电位，高效液相色谱法测量药物的包封率。微泡经冷冻干燥与60钴辐照消毒后，经兔耳缘静脉注射，观察其在兔肝内显像效果。 2.载药微泡联合超声体外诱导C6细胞凋亡的实验：采用MTT法检测各实验组不同时间点的OD值，并得出各组的细胞抑制率；检测不同处理方法、不同时间点对C6细胞增值的影响，并确定实验参数。流式细胞仪分析C6细胞的凋亡率（FITC-Annexin V/PI双染法）及细胞周期（PI单染法）。AO-EB双染后荧光显微镜观察C6细胞的形态学变化；透射及扫描电镜观察C6细胞超微结构的改变。 3.超声作用于自制载药微泡后对大鼠颅内胶质瘤的生长抑制作用：使用大鼠颅内立体定位仪建立Wistar大鼠颅内脑胶质瘤模型，MRI、HE染色及免疫组化法确定大鼠胶质瘤模型的成功建立。将40荷瘤鼠随机分为四组：①空白对照组；②单纯药物组；③单纯超声组；④超声+载药微泡，MRI评估处接种后7d、14d、21d各组肿瘤体积的大小，采用RT-PCR半定量各实验组观察肿瘤内BAX、BCL-2凋亡相关基因的改变。 结果： 1.载卡莫司汀脂质超声造影剂的物理特性：载药微泡的浓度为（2.6～3.1）×109/ml，平均粒径为1.05μm±0.20μm；卡莫司汀包封率为（42.6±0.11）％；电位为-（12.93±1.84）mV；经兔耳缘静脉注射后，兔肝内可见持续的增强显像效果。 2.超声联合载卡莫司汀脂质微泡的体外实验：超声+10％载卡莫司汀超声微泡组在6h时段细胞抑制率、细胞凋亡率均最高，与其他实验组及对照组相比差异均有显著统计学意义（P<0.01），超声破坏载药微泡使细胞增殖期（S期）比例减少。AO-EB双染后荧光显微镜观察及电镜观察超声联合载药微泡C6细胞出现凋亡形态学改变。 3.超声联合载卡莫司汀脂质微泡的动物实验：成功建立了大鼠颅内胶质瘤模型。分组处理后MRI结果显示，超声+载药微泡组肿瘤体积明显小于对照组及其他处理组，差异有显著统计学意义（P<0.01）；超声+载药微泡组使大鼠肿瘤组织内抗凋亡基因Bcl-2表达降低，Bcl-2/Bax的比值下降，而Bax基因表达未见明显变化，与对照组及其他处理组比较，差异有显著统计学意义（P<0.01）。 结论： 1.成功制备载卡莫司汀脂质超声造影剂，其粒径小、分布均匀，体内显影效果好，符合一般超声造影剂的特点。 2.自制的载卡莫司汀脂质微泡能在超声波的作用下诱导体外培养的C6细胞凋亡，并能抑制大鼠颅内胶质瘤的体积增长；通过下调Bcl-2抗凋亡基因及Bcl-2/Bax的比值抑制肿瘤细胞的生长。超声联合载卡莫司汀脂质微泡的研究为胶质瘤治疗提供一种新的思路。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

前言

第一部分 载卡莫司汀脂质超声造影剂制备及特性的研究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

参考文献

附图

第二部分 超声联合载卡莫司汀微泡诱导C6细胞凋亡的实验研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

附图

第三部分 超声联合载卡莫司汀脂质微泡抗大鼠脑胶质瘤生长的作用

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

附 图

全文总结

文献综述 超声联合微泡开放血脑屏障及安全性的研究

致 谢

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