miR-206抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞Cdc42蛋白的表达和对细胞骨架的影响

摘要

研究背景与目的:microRNA是一种长度只有19～30个核苷酸非编码RNA,能与mRNA3’非编码区结合降解mRNA或抑制翻译过程,从而起到负调控的作用。研究发现,microRNA对许多疾病的发生、发展过程都有调节作用,包括肿瘤。本研究拟探讨miR-206对MDA-MB-231乳腺癌细胞Cdc42蛋白表达的调控及对细胞骨架和细胞侵袭、迁移能力的影响。
　　 方法:采用LipofectamineTM2000转染miR-206进入MDA-MB-231细胞,48 h后处理,Western blot检测转染后乳腺癌细胞Cdc4、MMP-2和MMP-9蛋白质表达。用免疫荧光显微镜观察细胞形态及细胞丝状伪足的改变并计数细胞伪足的数量；进一步用侵袭迁移实验检测转染前后细胞侵袭力和迁移力的变化。
　　 结果:Western blot检测Cdc42、MMP-2和MMP-9在转染前后的表达,发现其条带灰度值与阴性对照组相比都明显下降(P<0.01)；免疫荧光计数每个细胞平均丝状伪足数,空白对照组为(14.99±5.53),表皮生长因子(EGF)组为(23.59±3.92),miR-206转染组为(9.45±3.59),miR-206+EGF组为(11.77±2.85)。与空白对照组和EGF组相比,miR-206转染组或miR-206+EGF组的细胞丝状伪足明显减少(P<0.05)。侵袭实验结果显示,小室膜下的细胞数量空白对照组为(311.7+23.5),miR-206转染组为(65.0±13.9),两者差异有统计学意义(P<0.05)。迁移实验结果显示,小室膜下的细胞数量空白对照组为(793.0±76.3),而miR-206转染组为(415.3±20.O),两者差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 结论:miR-206能抑制MDA-MB-231细胞Cdc42的表达和细胞丝状伪足的形成,并且能抑制细胞的侵袭迁移。