RNA干扰EGFR基因对卵巢癌细胞放疗敏感性影响的实验研究

摘要

目的:利用已经构建好的针对表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)基因的小于扰RNA(small interference RNA,siRNA)质粒,转染人卵巢癌SKOV3细胞株后,检测RNA干扰(RNAinterference,RNAi)对EGFR基因表达及评估细胞对放疗敏感性的影响。
　　 方法:应用体外构建的EGFR小发卡状RNA(short hairpinRNA,shRNA)的表达质粒,脂质体法转染入SKOV3细胞后行G418筛选阳性克隆。实验随机分为阳性RNA干扰组(A组)、阴性RNA干扰组(B组)、空白对照组(C组)。采用RT-PCR、Western Blot技术检测EGFRmRNA及其蛋白质的表达情况。分别给予不同放射剂量(0、2、4、6、8Gy)照射后,MTT法绘制细胞存活曲线。
　　 结果:序列特异性shRNA可明显抑制EGFR基因的表达,EGFRmRNA和蛋白的抑制率分别为77.5％和76.1％；序列特异性shRNA-EGFR可明显提高SKOV3细胞对放疗的敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。
　　 结论:体外研究表明RNAi沉默EGFR基因可以提高卵巢癌SKOV3细胞对放疗的敏感性。为卵巢癌的基因放疗提供一定的实验依据。