放线共生放线杆菌培养上清对成骨细胞分化及间隙连接通讯的影响

摘要

放线共生放线杆菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans，A.a）是已知的牙周病病原菌之一，其产生的多种毒力因子可造成牙槽骨破坏。有研究证明由于固定矫治器的使用而使口腔自洁功能降低，矫治初期2个月放线共生放线杆菌的检出率明显升高。错合畸形矫治中的正畸牙移动是牙槽骨组织学改建的结果，需要成骨细胞、破骨细胞和骨细胞的协同作用。细胞间的协同作用需要依赖于细胞间信息的传递，细胞间的间隙连接（gap junction，GJ）是细胞间信息传递的重要途径之一。细胞间隙连接是存在于动物组织中除血细胞、肿瘤细胞和骨骼肌细胞的一种细胞连接形式，是由间隙连接蛋白所形成的六聚体跨膜蛋白通道结构，通过它所介导的细胞间隙连接通讯，进行细胞间信息和能量的传递，调控细胞的新陈代谢、增殖和分化等生理过程。
　　 近来研究发现，成骨细胞分化与细胞间隙连接蛋白基因表达以及间隙连接胞间通讯功能调整密切相关。同时，胞间连接蛋白又受着许多机体内部因素，如生长因子、神经递质、激素等以及如细菌毒力因子等外源因素的调控。这些作用因素通过影响连接蛋白，进而调节骨组织中成骨细胞、破骨细胞等的数量，影响细胞代谢等活动，使骨组织发生相应改变。
　　 本课题对A.a培养上清对成骨细胞分化以及细胞间隙连接通讯的影响进行了系列研究，结果如下：
　　 1.在A.a培养上清中体外培养成骨细胞，中性红检测成骨细胞活性，进行A.a培养上清的成骨细胞毒性检测。结果显示20％以下浓度的A.a培养上清对成骨细胞无明显致死性。
　　 2.RT-PCR检测成骨细胞分化标记，研究A.a培养上清对成骨细胞分化的影响。结果显示A.a培养上清中成骨细胞分化标记的表达降低。
　　 3.划痕标记荧光染料示踪（SLDT）法研究A.a培养上清对成骨细胞间隙连接通讯的影响。结果显示A.a培养上清中成骨细胞荧光染料扩散距离低于对照组。
　　 4.Western blot检测Connexin43的表达，研究A.a培养上清对成骨细胞间隙连接通讯的影响。结果显示A.a培养上清中成骨细胞Connexin43表达降低。
　　 实验结果显示A.a培养上清对成骨细胞分化及细胞间隙连接通讯有抑制作用，提示A.a能通过抑制成骨细胞间间隙连接通讯，从而阻碍成骨细胞向骨细胞的分化，打破成骨与破骨的平衡状态。提示口腔中A.a检出率升高，可能影响正畸牙的移动时的骨改建。