RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化及细胞凋亡的调节作用

摘要

目的:研究ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录的影响,探讨RNA聚合酶Ⅱ转录ALU的生理功能。
　　 方法:(1)将Alu全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子的下游,构建重组质粒pcDNA3.1-ALU；(2)转染293细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR筛选稳定表达ALU的克隆；(3)western-blot法检测稳定表达PCDNA3.1-ALU293细胞PKR的磷酸化水平及与干扰素的关系。(4)MTT及Cellular DNA Fragmentation ELISA法检测稳定表达PCDNA3.1-ALU293细胞组的增殖抑制与凋亡情况。(5)MTT及Cellular DNA Fragmentation ELISA法检测瞬时表达PCDNA3.1-ALU293细胞组的增殖抑制与凋亡情况。(6)MTT及Cellular DNA Fragmentation ELISA法检测瞬时表达PCDNA3.1-ALUHepG2细胞组的增殖抑制与凋亡情况。
　　 结果:(1)Alu全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子直接下游能够被RNA聚合酶Ⅱ有效转录,说明ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子并不影响RNA聚合酶Ⅱ的转录。(2)western-blot结果表明:RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU能够激活PKR的活性。(3)凋亡结果表明:RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU以及干扰素处理的细胞组细胞增殖受到抑制,且与对照组相比,更容易发生凋亡。
　　 结论:ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录没有明显的影响,反而可以通过形成双链RNA的方式激活PKR的活性,诱导细胞凋亡。