靶向CD133的RNA干扰对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用

摘要

目的:利用RNA干扰技术下调SMMC-7721肝癌细胞中CD133的表达,观察其在肝癌细胞增殖和侵袭方面的作用。
　　 方法:于体外构建CD133特异性的shRNA真核表达载体,脂质体法转染SMMC-7721肝癌细胞然后经G418筛选出稳定表达的阳性克隆;应用RT-PCR和Westem blot检测CD133mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。
　　 结果:成功于体外构建表达质粒PGPH1/GFP/Neo-shGAPDH,PGPH1/GFP/Neo-shNC,PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133-2并转染SMMC-7721肝癌细胞,筛选后得到稳定的阳性克隆,经RT-PCR和Western blot检测显示转染PGPH1/GFP/Neo-CD133-1和PGPH1/GFP/Neo-CD133.2后CD133 mRNA和蛋白表达均受到显著抑制,mRNA抑制率分别为32.98％和76.16%;蛋白表达抑制率分别为49.46%和159.15%。与未转染组和PGPH1/GFP/Neo-shNC组相比,PGPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞凋亡比例明显增加(P＜0.05);PGPH1/GFP/Neo-CD133-2组细胞的增殖和侵袭能力也受到显著抑制(P＜0.05)
　　 结论:靶向CD133的RNA干扰能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞中的CD133表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖和侵袭。