超声微泡造影剂联合脂质体介导pNogo-R shRNA转染神经干细胞的体外实验研究

摘要

第一部分
　　 超声微泡介导pGPU6/Neo质粒转染神经干细胞参数优化的实验研究
　　 目的:探讨超声微泡介导pGPU6/Neo质粒转染大鼠NSCs的最优参数。
　　 方法:以一定能量的超声介导质粒转染大鼠NSCs,分为:空白组、pGPU6/Neo质粒组、pGPU6/Neo质粒+微泡组、pGPU6/Neo质粒+超声组、pGPU6/Neo质粒+微泡+超声组,并按不同转染条件分为亚组。转染48h后荧光显微镜观察转染效率,台盼蓝染色法检测细胞活性。
　　 结果:最优参数为声强1.0W/cm2,辐照时间30s时,超声微泡介导质粒转染率最高,且对细胞活性无明显影响。超声微泡介导质粒对NSCs的转染效率,明显高于其他实验组(P＜0.05)。
　　 结论:在超声声强为1.0W/cm2,辐照时间30s的条件下,超声微泡造影剂能够安全、有效地介导基因转染NSCs。
　　 第二部分
　　 超声微泡造影剂联合脂质体介导pNogo-R shRNA转染神经干细胞的实验研究
　　 目的:探讨超声微泡介导pNogo-R shRNA转染大鼠NSCs的有效率及可行性,同时评估UMMD联合脂质体提高基因转染效率的协同作用。
　　 方法:NSCs自清洁级SD新生大鼠分离获得,以不同的方式转染培养至第三代的NSCs,分为:A.空白组、B.阴性质粒+超声微泡组、C.pNogo-R shRNA质粒+超声微泡组、D.pNogo-R shRNA质粒+脂质体组、E.pNogo-R shRNA质粒+超声微泡+脂质体组。
　　 结果:荧光显微镜观测结果显示,E组转染效率明显高于其他实验组,而C组与D组间无显著差异;同时,台盼蓝染色法显示,与其他组相比较,超声微泡联合脂质体组对细胞活性影响无显著差异;转染24小时后,E组Nogo-R的蛋白及mRNA表达水平明显低于其他组别(P＜0.05),差异具有统计学意义。
　　 结论:本研究结果表明,超声微泡联合脂质体的基因转染为一非侵袭性转染方法,对细胞活性影响小,具有一定可行性。超声微泡和脂质体的联合作用能增强pNogo-R shRNA质粒转染NSCs,这种联合转染方式为NSCs转基因治疗提供了一种新方法。