HSP70介导的川芎嗪预处理对大鼠视网缺血再灌注损伤保护作用的研究

摘要

目的：研究川芎嗪预处理在视网膜缺血再灌注中对HSP70表达的影响以及对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用,对比川芎嗪预处理与5分钟缺血预适应对视网膜缺血再灌注损伤保护作用的大小。
　　 方法：选取正常健康SD大鼠60只,随机分为5组:对照组(Con组)、缺血再灌注组(IR组)、川芎嗪预处理组(Lig组)、缺血预适应组(IP组)、川芎嗪+ACTD组(ACTD组),用前房灌注法建立大鼠高眼压模型,维持60分钟后解除高眼压状态,造成大鼠急性视网膜缺血再灌注损伤,Lig组在前房灌注前24小时予川芎嗪80mg/kg腹腔注射,每8小时一次,共三次;IP组在60分钟前房灌注前24小时给予5分钟视网膜缺血;Lig+ACTD组予ACTD7mg/kg经大鼠尾静脉注射,其余同Lig组;对照组只行前房穿刺,不升高生理盐水瓶。在术后1、12、24、72、168小时对大鼠视网膜行形态学观察、分子生物学及功能学检测:行双眼FERG检查,后处死大鼠,取视网膜组织检测SOD、MDA含量;取大鼠视网膜标本进行苏木素/伊红(HE)染色光镜下观察;透射电镜(TEM)观察视网膜超微结构;免疫组织化学方法检测HSP70在视网膜的表达。
　　 结果：1.FERG检查:IR组、ACTD组b波及ops波振幅明显下降,Lig组和IP组b波及ops波波幅恢复率明显高于视网膜缺血再灌注损伤组,均低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。
　　 2.HE染色光镜观察:视网膜再灌注后1h即出现视网膜水肿,随时间的延长水肿程度加重,并可见细胞结构紊乱等变化。Lig组和IP组视网膜水肿、细胞结构紊乱程度较对照组明显减轻。
　　 3.透射电镜观察:随时间的延长,IR组大鼠视网膜细胞受损逐渐加重;再灌注相同时间点,Lig组和IP组大鼠视网膜细胞的超微结构要明显优于IR组及ACTD组。
　　 4.SOD活性及MDA含量检测:IR组大鼠视网膜组织SOD活性降低,MDA含量增高,在Lig组及IP组视网膜SOD活性明显高于对照组,MDA含量低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 5.HSP70免疫组织化学检测:HSP70在IR组见少量表达,川芎嗪预处理、缺血预适应能诱导HSP70的表达增高,与IR组比较有统计学意义(P＜0.05),ACTD能抑制HSP70的表达。
　　 结论：1.生理盐水前房灌注法建立大鼠急性视网膜缺血再灌注损伤模型简单易行,成模率高。60分钟持续缺血对大鼠视网膜造成不可逆性损伤,视网膜神经元凋亡,HSP70少量表达。
　　 2.HSP70参与介导川芎嗪预处理对大鼠视网膜缺血再灌注损伤的保护作用。
　　 3.中药川芎嗪预处理与缺血预适应(有创,实际临床应用受限制)对大鼠视网膜缺血再灌注损伤有相似的保护作用,然而由于前者具有安全无创性,因而其临床应用更为方便,更易推广。