FoxO1-shRNA干扰质粒对水通道蛋白9在正常人肝细胞中表达的影响

摘要

目的:观察FoxO1基因沉默对水通道蛋白9(AQP9)在正常人肝细胞L-02中表达的影响。
　　 方法:将4条特异性干扰质粒FoxO1-shRANA1～4经脂质体法瞬时转染L-02细胞,荧光显微镜下观察转染效率,筛选沉默效率最佳的一条质粒载体转染肝细胞,经RT-PCR法检测其对AQP9基因表达的影响;细胞免疫荧光、Western blot法检测其对AQP9蛋白表达的影响;并在转染后不同时间点收集细胞,实时荧光定量PCR检测转染后FOXO1抑制AQP9转录表达的时间谱。
　　 结果:4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4均有不同程度的沉默效果,其中以FoxO1-shRNA2沉默效果最佳,与对照组相比,AQP9在L-02细胞中的mRNA及蛋白水平的表达水平下降差异有统计学意义(P＜0.05);定量PCR检测显示,AQP9的表达随转染时间的延长而降低,在转染后60 h达抑制峰值,差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论:FoxO1基因沉默对AQP9在正常肝细胞中的表达有确切的影响,AQP9基因和蛋白的表达会随FoxO1表达降低而降低,在60h达到抑制峰值;本研究为我们进一步采用染色质免疫共沉淀技术探讨不同时间点FoxO1与AQP9启动子区IRE结合水平的动态变化提供了前期实验依据。