苯甲酸利扎曲普坦的色谱分析方法学研究

摘要

曲普坦类药物是治疗偏头痛急性发作的特效药,苯甲酸利扎曲普坦作为第2代曲普坦类药物,通过激动5-HT1B/1D受体而发挥作用。由于5-HT1B/1D受体在脑部分布广泛,苯甲酸利扎曲普坦具有起效快、疗效好及应用范围广等特点,同时其作用途径多样、副作用小、性价比优良。目前,苯甲酸利扎曲普坦在欧美发达国家已经得到了很好的应用。然而,因为我国偏头痛的临床治疗教育不足、临床诊断指南的可操作性较差等原因,影响了偏头痛的临床治疗水平。为满足临床需要,国内开始致力于苯甲酸利扎曲普坦及其制剂的研究开发。其中,建立苯甲酸利扎曲普坦及其制剂的准确、快速的分析方法,对其进行有效的质量控制是研究开发的一项重要内容。
　　 目的:
　　 1.建立同时测定苯甲酸利扎曲普坦含量及有关物质RP-HPLC法。
　　 2.建立测定苯甲酸利扎曲普坦有机残留溶剂GC法。
　　 方法:
　　 1.苯甲酸利扎曲普坦含量及有关物质RP-HPLC测定方法
　　 色谱柱:Phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A相为乙腈-5 mmol·L-1庚烷磺酸钠溶液(24:76,醋酸调pH3.4),B相为乙腈-5 mmol·L-1庚烷磺酸钠溶液(38:62,醋酸调pH3.4);梯度洗脱:0～12 min,A相85％→85%,12～24 min,A相85%→10%,24～25 min,A相10%→85%,25～32 min,A相85%→85%;流速:1.0ml·min-1;柱温:30℃;检测波长:227 nm;进样量:20μl。
　　 2.苯甲酸利扎曲普坦有机残留溶剂GC测定方法
　　 色谱柱:DB-624型毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm×1.80μm);载气:高纯氮气;检测器:FID;进样口温度:200℃;柱温(程序升温):60℃保持3 min,以20℃·min-1升温至165℃,再以50℃·min-1升温至200℃,保持5 min;检测器温度:250℃;载气流速:1.1 ml·min-1;分流比:10:1;顶空进样量:1 ml;顶空温度:60℃;顶空平衡时间:30 min。
　　 结果:
　　 1.苯甲酸利扎曲普坦含量及有关物质RP-HPLC测定方法
　　 利扎曲普坦峰与相邻杂质峰的分离符合要求;苯甲酸利扎曲普坦在0.02～16μg·ml-1浓度范围内线性关系良好(r=1.0000);苯甲酸利扎曲普坦低、中、高3个浓度的平均回收率(n=3)分别为100.0%(RSD=0.96%),100.8%(RSD=1.3%),102.6%(RSD=1.5%)。
　　 2.苯甲酸利扎曲普坦有机残留溶剂GC测定方法
　　 甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和异丙醚色谱峰的分离均符合要求;甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和异丙醚的检测限分别为4.4812,4.6556,0.8710,2.3656和0.0078 ppm;浓度的线性范围分别为2.820～187.980μg·ml-1(r=0.9995),2.906～242.140μg·ml-1(r=0.9979),0.052～172.300μg·ml-1(r=0.9983),0.005～123.830μg·ml-1(r=0.9990)和1.436～119.650μg·ml-1(r=0.9988);平均回收率(n=9)分别为96.7%(RSD=8.1%),99.9%(RSD=9.7%),95.1%(RSD=9.9%),99.6%(RSD=9.3%)和97.8%(RSD=6.9%)。
　　 结论:
　　 所建离子对梯度洗脱RP-HPLC法专属性强、准确、简便,可用于苯甲酸利扎曲普坦含量和有关物质的同时测定,且可通过对痕量杂质的检查识别失控的生产过程。所建顶空GC法专属性强、灵敏、准确、简便,适用于苯甲酸利扎曲普坦有机残留溶剂的测定。