RP-HPLC测定大鼠体内D、L-神经兴奋型氨基酸的含量

摘要

目的：
　　建立一种同时测定大鼠血清和脑组织中D、L-天门冬氨酸、谷氨酸和丝氨酸的高效液相色谱法，通过比较正常组与抑郁模型组血清和脑组织中氨基酸含量的差异，研究探索神经兴奋型氨基酸与抑郁症的关系。
　　方法：
　　柱前手性衍生化试剂：邻苯二甲醛(OPA)和N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)；色谱条件：色谱柱：Phenomenex C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：50mmol/L醋酸铵(pH6.8)-甲醇(96:4，v/v)，流速：1mL/min；荧光检测波长：Ex350nm，Em450nm。
　　结果：
　　D、L-天门冬氨酸、谷氨酸和丝氨酸三对对映异构体衍生物的分离度为1.21、2.20和1.53，且不受其他氨基酸异构体和内源性物质的干扰；D、L-天门冬氨酸、D-氨基酸在5～1000ng/mL范围内线性关系良好，相关系数r≥0.9997；L-氨基酸在25～5000ng/mL范围内线性关系良好，相关系数r≥0.9998。应用此方法能准确测定大鼠血清和脑组织中三对神经兴奋型氨基酸对映体的含量。
　　结论：
　　建立了一种准确、可靠且灵敏度高的测定生物样品中D、L-天门冬氨酸、D、L-谷氨酸和D、L-丝氨酸的分析方法，通过对照组与抑郁模型组实验测定结果的分析比较，发现在抑郁模型组的血清和下丘脑中L-丝氨酸含量明显降低，而D-丝氨酸含量明显升高，且有显著性差异(P<0.05)，而谷氨酸和天门冬氨酸的变化并不明显。血清中L-丝氨酸含量明显降低，或D-丝氨酸含量明显升高，或L/D丝氨酸含量比值可为抑郁症疾病的诊断的新指标。