RNAi沉默整合素链接激酶基因质粒构建及对肺癌A549细胞生物学活性影响

摘要

目的：构建特异性抑制ILK基因表达的siRNA真核表达载体，筛选出最佳抑制效率组，并检测其对肺癌A549细胞生物学活性的影响。
　　方法：根据Genbank中人ILK基因序列，利用在线设计软件设计三对siRNA寡核苷酸链。分别克隆进pGenesil-1质粒中，构建重组pGenesil-ILK1、pGenesil-ILK2、pGenesil-ILK3质粒。经酶切及测序鉴定后，重组质粒稳定转染A549细胞，用半定量PCR及Western-blot分别检测ILKmRNA及蛋白质表达情况，分析各组ILK抑制效率。最后通过流式细胞术及MTT法检测该质粒对肺癌A549细胞增殖及凋亡情况的影响。
　　结果：酶切及测序证实pGenesil-ILK1、pGenesil-ILK2、pGenesil-ILK3重组质粒构建成功，稳定转染A549细胞后，明显抑制了ILKmRNA及蛋白质的表达，其中pGenesil-ILK1具有最佳抑制效率。流式细胞术检测pGenesil-ILK1 A549细胞，结果提示ILK沉默的A549细胞凋亡细胞显著增加(p<0.05)，MTT结果提示其细胞增殖能力显著降低(p<0.05)。
　　结论：成功构建了高效抑制ILK表达的siRNA真核表达载体，抑制A549细胞ILK基因表达可促进其凋亡和抑制其增殖，为肺癌靶向基因治疗研究奠定基础。