液基细胞学、HPV及hTERC、C-MYC基因检测在宫颈癌筛查和随访中的相关性研究

摘要

目的:
　　1、本文通过检测宫颈病变患者宫颈上皮脱落细胞中人端粒酶mRNA(human telomerase mRNA component，hTERC)基因和c-myc基因的表达以及人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的感染情况和液基细胞学检测的分级，以临床病理结果为金标准，分析比较液基细胞学、HPV检测、hTERC和c-myc基因扩增检测对宫颈病变的预测价值。
　　2、将c-myc基因、hTERC基因、HPV亚型及薄层液基细胞学(thinPrep cytologic test，TCT)的检查结果进行比较及相关性的分析，拟寻求宫颈病变筛查更准确的联合检测方法。
　　3、对行宫颈锥切和子宫切除治疗的CIN患者进行随访，检测hTERC、c-myc基因、HPV亚型及TCT，探讨hTERC、c-myc基因检测及其联合HPV、TCT检测在CIN手术治疗后随访中的价值。
　　方法:
　　选择2011年1月～2011年9月就诊于重庆医科大学附属第一医院妇科的1000例已婚或有性生活史，年龄25～64岁，符合入选要求的妇女。所有入选患者均刷取宫颈脱落细胞行液基细胞学检查，其残留液同时用作荧光原位杂交(fluorescence in situ hxbridization，FISH)技术检测c-myc基因、hTERC基因的表达，表面等离子共振(surface plasmonresonance，SPR)技术检测HPV亚型。液基细胞学、HPV亚型、hTERC基因、c-myc基因任一指标阳性的患者均行阴道镜及病理活组织检查。以病理学结果为金标准，分析液基细胞学、HPV检测、hTERC基因和c-myc基因检测单独筛查对于子宫颈癌筛查的灵敏度和特异性，评价与临床病理结果的相关性。
　　经筛选有117例患者需行阴道镜检查及活检，但有2例主动放弃。所以有115例患者有病理学结果。对病检正常/炎症和CINⅠ者直接随访而不治疗;CINⅡ、CINⅢ、SCC均采取手术治疗为主，术后6月随访。随访中，26例失访，其中以炎症、全子宫切除患者为主;有89例复诊，并于6个月时对其再次刷取宫颈脱落细胞行TCT、HPV、c-myc、hTERC检测，有异常时行阴道镜下宫颈活检及组织病理学检查。
　　结果:
　　1、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC患者中TCT检测结果的阳性率分别为87.5％、96.4％、100％、100％。随着病理级别的增高，TCT检查结果的阳性率增加。但对不同等级CIN的筛查，没有明显的优越差异(P=0.061)。
　　2、随着病变组织病理学程度的增加，c-myc基因阳性扩增患者病例数增加，c-myc基因阳性扩增率增加，在正常组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、SCC组中c-myc基因扩增阳性患者比率分别为:41.67％，18.75％，39.29％，54.90％，87.50％。结果显示:不同病理级别之间c-myc基因扩增的阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　3、病理检测级别为正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC的患者中hTERC的阳性率分别是:33.33％、25％、50％、68.63％、87.50％。随着病变严重程度增加，hTERC基因扩增的阳性率增加。
　　4、随着病理学级别的升高，HPV基因扩增的阳性表达率在正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC的患者HPV的阳性率分别是:75.00％、68.75％、100.00％、88.24％、87.50％。结果表明:HPV阳性表达在不同病理学级别组中，差异有统计学意义。
　　5、TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因单独检测对宫颈癌及CIN检测的灵敏度分别为86.21％、92.00％、52.9％、64.40％，特异度分别为70.00％、26.70％、70.00％、70.00％。 TCT+c-myc、TCT+hTERC、HPV+c-myc、HPV+hTERC、c-myc+hTERC检测的灵敏度分别为93.50％、95.09％、96.23％、97.15％、83.28％，特异度分别为91.00％、91.00％、78.01％、78.01％、91.00％; TCT+HPV+c-myc、TCT+HPV+hTERC、 TCT+HPV+c-myc+hTERC的灵敏度分别为:99.48％、99.61％、99.81％，特异度分别为:93.40％、93.40％、98.02％。hTERC、c-myc基因单独检测的灵敏度和特异度均不高，但分别与常用检测方法HPV+TCT三联合，其特异度和灵敏度均有较大幅度的增高，较c-myc基因，hTERC基因单独检测及传统的TCT+HPV联合检测在灵敏度方面显示出更大的优越性;四联合的灵敏度和特异度分别高达99.81％和98.02％，但同时检测两个基因加重了患者的经济负担。
　　6、CIN患者中69例行锥切手术，其中3例失访，66例6个月复诊。66例CIN治疗前、后TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因的检测结果，进行对比分析，得出CIN治疗后TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因的阳性率明显降低，与对应的治疗前比较，差异均有具有统计学意义。
　　结论:
　　1、C-myc、hTERC基因扩增可能是宫颈癌形成的早期事件，在宫颈癌变的过程中c-myc、hTERC基因可能起着重要的作用，其可作为宫颈癌筛查的分子标志。二者的扩增情况对预测CIN复发或进展有重要参考价值，其可作为CIN治疗后的一种随访手段。
　　2、HPV感染与宫颈上皮内瘤变密切相关。尤其是HPV高危型患者CIN发病率较高，HPV高危型检测在宫颈病变的检查中有重要意义。由于HPV感染率高，特异性太低，与宫颈细胞学检查(TCT)相结合可明显提高宫颈病变的检出率，为目前主要的联合筛查CIN的方法。
　　3、HPV感染与c-myc、hTERC基因扩增率成正相关，在宫颈癌前病变中，c-myc、hTERC基因扩增与HPV感染在宫颈癌前病变及宫颈癌的发生发展中起着重要的作用。二者在宫颈病变中的异常表达存在相关性。c-myc、hTERC基因检测与常用检测TCT+HPV联合灵敏度、特异度显示更高，所以认为TCT+HPV+hTERC或TCT+HPV+c-myc为最佳组合。
　　4、FISH技术具有客观、可重复、无创等优点，并且利用宫颈脱落细胞残液对宫颈病变进行筛查，检测c-myc、hTERC基因，可弥补TCT灵敏度差、HPV特异性差的缺点，可作为目前“三阶梯”及HPV检测以外的有力检测方法。
　　5、本研究采用表面等离子共振技术(SPR)对不同宫颈病变的脱落细胞HPV DNA进行检测。HPV阳性表达在不同病理学级别组中，差异有统计学意义。但是，与组织病理学级别没有正相关关系（与文献报道有差异）。这可能与病例数太少或者检测方法有关，有待进一步用SPR技术检测研究。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

参考文献

第一部分 液基细胞学、HPV及hTERC、C-MYC基因检测在宫颈病变筛查中的研究

实验一 液基细胞学检测对宫颈病变的诊断价值

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

实验二 宫颈脱落细胞中C-MYC基因检测在宫颈病变诊断中的价值

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

实验三 宫颈脱落细胞中hTERC基因检测在宫颈病变诊断中的价值

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

实验四 宫颈脱落细胞中HPV检测在宫颈病变诊断中的价值

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第二部分 液基细胞学、HPV及hTERC、C-MYC基因在宫颈病变筛查中的相关性

第一节 液基细胞学、HPV及hTERC基因的相关性

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第二节 液基细胞学、HPV及C-MYC基因的相关性

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第三节 液基细胞学、C-MYC及hTERC基因的相关性

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第四节 液基细胞学、HPV及C-MYC、hTERC基因的相关性

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

第三部分 液基细胞学、HPV及hTERC、C-MYC基因检测在宫颈病变随访中的研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

全文结论

附图

文献综述 hTERC和C-MYC基因与宫颈病变的研究

致谢

攻读博士学位期间发表的文章及课题