耐药相关基因HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

摘要

目的:检测耐药相关基因HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp在急性白血病(AL)患儿骨髓单个核细胞(BMMNC)中的表达，探讨其在AL治疗中的临床意义。
　　方法:将81例急性白血病患儿作为实验组，包括初诊组（39例）、缓解组（37例）和难治复发组（5例）;14例免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患儿作为对照组。采用实时荧光定量PCR方法检测BMMNC中HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp基因的表达，比较实验组与对照组间及各实验组间表达的差异。
　　结果:
　　①对照组、初诊组、缓解组以及难治复发组各组中HA117、mdr、mrp1、lrp、bcrp阳性表达率分别依次为:143％、35.7％、42.8％、28.6％、35.7％,38.5％、69.2％、84.6％、74.3％、59.0％;18.9％、56.8％、86.4％、89.1％、64.9％,40.0％、80.0％、100％、80.0％、80.0％。
　　②各白血病实验组与对照组相比，HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp阳性表达率均高于对照组，难治/复发组HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp的表达率均高于初诊组及缓解组。
　　③HA117、lrp阳性的CR1率低于阴性的CR1率(P＜0.05)，mdr1、mrp1、bcrp阳性的CR1率高于阴性的CR1(P＞0.05)。
　　④在AL各危险度分组中，五种基因的表达率和表达水平均高于对照组(P＜0.05);在各危险度组间的表达的差别无统计学意义(P＞0.05)。
　　⑤ALL组与AML组五种目的基因表达水平均高于对照组(P＜0.01);基因HA117、mdr1、mrp1在AML组表达水平高于ALL组(P＞0.05)，lrp、bcrp基因ALL组表达水平高于AML组(P＞0.05)。
　　⑥五种目的基因在AL组表达水平均高于对照组(P＜0.05)，同时在AL组间，难治/复发组表达水平最高。HA117在难治/复发组表达水平高于初诊组及缓解组(P＜0.05);mdr1、mrp1在初诊组及难治/复发组表达均较缓解组高(P＜0.05);lrp缓解组表达低于初诊组(P＜0.05);bcrp难治/复发组表达高于缓解组表达(P＜0.05);各基因在其余组间表达无差异。
　　⑦直线相关分析显示，AL中HA117与mdr1、mrp1、lrp、bcrp表达无明显相关性;mdr1与mrp1、mdr1与bcrp、lrp与bcrp呈正相关(r=0.26、0.308、0.317，P＜0.05)。难治/复发组中，HA117与mdr1、mrpl、lrp及bcrp呈完全正相关。
　　结论:
　　①在AL中，基因HA117、mdrl、mrp1、lrp、bcrp表达增高，尤其在难治/复发组中表达增高显著。
　　②在AL难治/复发组，基因HA117与mdr1、mrp1、lrp及bcrp表达呈完全正相关;五种基因阳性时的CR1率均低于阴性的CR1率，提示HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp均可能参与了儿童AL耐药的产生;因此HA117可作为评估化疗效果与预后的重要指标之一。

目录

声明

符号说明

摘要

前言

1 实验材料

1．1 临床研究资料

1．2 主要实验仪器

1．3 主要试剂

1．4 试剂的配制

2 方法

2．1 实验分组

2．2 收集临床骨髓标本并分离BMMNC

2．3 提取BMMNC中的总RNA

2．4 逆转录合成cDNA

2．5 RT-PCR检测目的基因表达

2．6 Real-Time PCR检测目的基因的表达

2．7 数据处理

3 结果

3．1总RNA完整性鉴定

3．2总RNA纯度鉴定

3．3 RT-PCR检测HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp基因的表达

3．4 Real-Time PCR检测HA117、mdr1、mrp1、lrp、bcrp的表达

4 讨论

4．1 儿童急性白血病的多药耐药

4．2 五种目的基因在儿童急性白血病中的表达

全文总结

参考文献

文献综述

致谢

攻读硕士学位期间发表学术论文情况