鼻咽癌PCDGF表达及siRNA对HNE-1细胞株增殖的影响

摘要

背景：鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是中国南方常见的一种头颈部恶性肿瘤，其恶性程度高，具有强大的侵袭转移能力，且发病部位隐蔽，早期诊断难。畸胎瘤细胞源性生长因子(PC cell-derivedgrowth factor，PCDGF)又名progranulin，acrogranin，属于生长因子家族：颗粒蛋白(granulin，GRN)中的一员，其在多种肿瘤中高表达，如乳腺癌，卵巢癌，食管鳞状细胞癌，非小细胞肺癌，多发性骨髓细胞瘤等，参与肿瘤的发生、增殖、浸润、转移。因此沉默肿瘤细胞中PCDGF表达有助于防治肿瘤的增殖转移。RNAi是一种抑制特定基因产物表达的有效方法，是由双链RNA(dsRNA)介导的特异性降解相应序列的mRNA，导致靶基因的沉默。本研究采用RNA干扰技术，沉默PCDGF表达，探讨其对鼻咽癌细胞株HNE-1生物学行为的影响，以期为鼻咽癌的诊断与治疗提供实验室依据。
　　目的：探讨畸胎瘤细胞源性生长因子(PC cell-derived growthfactor，PCDGF)在人鼻咽癌中的表达，并研究其表达与患者临床病理特征之间的关系。构建针对PCDGF特异性的小干扰RNA(smallinterferirng RNA，siRNA)，研究其对鼻咽癌HNE-1细胞增殖的影响。
　　方法：采用免疫组织化学的方法检测53例鼻咽癌，28例鼻咽慢性炎症组织中PCDGF蛋白的表达情况，并结合患者的临床病理资料对结果进行统计分析；同时采用荧光免疫细胞化学法检测人鼻咽癌细胞株HNE-1细胞PCDGF表达。根据PCDGF基因设计合成两条siRNA，利用lipofectamineTM2000转染鼻咽癌HNE-1细胞，并在荧光显微镜下检测转染效率。通过real-time PCR、Western blot检测转染后细胞PCDGFmRNA和蛋白表达，采用MTT检测转染后细胞的生长增殖情况，FCM法检测细胞周期分布。
　　结果：53例鼻咽癌组织中PCDGF阳性表达率为82.02％(44/53)，28例鼻咽部慢性炎症组织中阳性率为17.86％(5/28)，两组间差异有统计学意义(P<0.01)。鼻咽癌组织中PCDGF的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及病理分期密切相关(P<0.05)，而与性别无关(P>0.05)。2条重组质粒均能特异性的抑制PCDGF mRNA和蛋白的表达，其中siRNA-1的沉默效率最高。转染48 h后，HNE-1细胞中PCDGF mRNA和蛋白表达水平分别下调59.3％和57.6％，细胞增殖抑制率为(37.07±12.4)％，siRNA-1组GO/G1期细胞增多，S期细胞数量明显减少(P<0.05)，细胞周期被阻滞于G1期。
　　结论：特异性siRNA能够有效沉默PCDGF基因表达，并显著抑制鼻咽癌HNE-1细胞增殖。