载脂蛋白E基因多态性对脑损伤后血脑屏障紧密连接修复的影响

摘要

目的:探讨载脂蛋白E基因(APOE)不同亚型对创伤性脑损伤(TBI)后血脑屏障(BBB)修复的影响及相关机制。
　　方法:
　　①以APOE转基因鼠(ε3、ε4)、APOE敲除鼠及APOE野生鼠为研究对象，各型鼠随机分为脑损伤组、假手术组和正常对照组，以PSI颅脑损伤撞击器精确打击制备TBI模型;
　　②伤后1d、3d、7d通过检测伤灶皮层中的大分子伊文思蓝(EB)和小分子荧光素钠(NaFI)含量来评价BBB通透性的变化，同时通过干湿重法测定脑组织含水量;
　　③伤后7d采用qRT-PCR法及western blot法检测不同APOE基因型鼠损伤灶脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白occludin及Claudin-5的转录及表达。
　　结果:各型鼠正常对照组间BBB对EB和NaFI通透性比较，ε4鼠和敲除鼠BBB对EB和NaFI通透性明显高于ε3鼠和野生鼠;伤后各型鼠BBB通透性明显增高，伤后1d、3d各型鼠间BBB对EB和NaFI的通透性比较，差异无统计学意义;伤后7d野生鼠及ε3鼠BBB对EB的通透性已降至各自的未损伤水平(P＞0.05)，但APOE敲除鼠及ε4鼠BBB对EB的通透性仍高于各自的未损伤水平(P＜0.01);APOE敲除鼠及ε4鼠BBB对NaFI的通透性明显高于野生鼠及ε3鼠(P＜0.01)。伤后1d、3d、7d各型鼠间脑组织含水量比较，差异无统计学意义。Western blot及qRT-PCR表明:APOE敲除鼠及￡4鼠脑微血管中的occludin及Claudin-5在基因转录和翻译水平均明显低于野生鼠及ε3鼠(P＜0.05)。
　　结论:APOE在维持BBB正常功能及损伤后BBB的修复过程中发挥了重要作用，ε4在维持BBB正常通透性及损伤后修复两方面均明显减弱，通过作用于紧密连接的修复进而影响BBB损伤后的修复。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1．材料与方法

1．1 试剂与仪器

1．2 实验动物与分组

1．3 创伤性脑损伤模型制备

1．4 血脑屏障通透性测定

1．5 脑组织含水量的测定

1．6 Western blot法测定occludin和Claudin-5的表达

1．7 qRT-PCR检测Ocln和Cldn5的转录水平

1．8 统计学处理

2．结果

2．1 血脑屏障通透性的变化

2．2 脑组织含水量的变化

2．3 occludin和Claudin-5蛋白表达量的变化

2．4 Ocln和Cldn5基因转录水平的变化

3．讨论

参考文献

附图

全文总结

文献综述 血脑屏障在维持健康与疾病发生中作用

致谢

攻读硕士学位期间发表的文章