竹红菌素修饰纳米脂质微泡联合LED光源照射人舌癌细胞Tca8113的实验研究

摘要

目的:
　　1.实验室自制竹红菌素修饰的纳米脂质微泡，并测定其粒径大小、电位、包封率等物理性质;将HB溶于DMSO中，用UV-2102PC紫外分光光度计检测，确定检测波长。
　　2.常规培养人舌癌细胞，观察竹红菌素修饰纳米脂质微泡在细胞中的吸收代谢规律，选定最佳时间，而后联合LED光源照射观察对癌细胞的作用。
　　方法:
　　第一部分1.制作微泡实验室机械振荡法自制竹红菌素修饰纳米脂质微泡以及空白微泡，分别用马尔文激光粒径测量仪、Malvern表面电位检测仪、UV-2102PC紫外分光光度计侧定其粒径、电位、包封率。2.实验室配置成溶剂为DMSO，溶质为HB，浓度为1mg/ml的棕黄色液体，加入到100ml含5％胎牛血清的RPMI-1640培养液中，稀释成HB终浓度为0.5μM，用UV-2102PC紫外分光光度计在波长400nm-700nm范围内连续扫描，可得出HB的吸收光谱图，选取最高值作为后续实验条件。
　　第二部分1.细胞培养在含5％胎牛血清的RPMI-1640培养液中常规培养Tca8113细胞。2.竹红菌素修饰脂质微泡的吸收代谢规律取对数生长期的Tca8113细胞，加入含20μM纳米光敏剂的RPMI1640，分别培养2h，4h，6h，8h，10h，12h，PBS冲洗两次，离心两次后用DMSO裂解细胞，放置30分钟。用分光光度计检测荧光值，激发波长为475nm，发射波长为600nm。3.观察HB修饰脂质微泡联合LED光源照射对细胞Tca8113的作用于96孔板中加入处于对数生长期的Tca8113细胞，每孔2*104个细胞，每组设3个复孔，将细胞培养到次日加入HB修饰的微泡，浓度为0-10μmol/L。孵育6小时后在暗室内进行光照处理，能量密度为0-3J/cm2，波长为475nm，继续培养18小时，用MTT法检测各孔吸光度值OD值，按照以下公式计算各组细胞的抑制率，细胞抑制率(％)-（对照组的OD-处理组的OD值）/对照组的OD值*100％，所有实验数据重复计算三次。4.流式观察HB修饰脂质微泡联合LED光源照射对细胞Tca8113的作用将细胞分成五组，①实验细胞组:HB微泡浓度10μM，光能量为3 J/cm2;②空白对照组:HB微泡浓度0μM，光能量为0J/cm2;③单纯光照组:HB微泡浓度0μM，光能量为3J/cm2;④单纯HB微泡组:HB微泡浓度10μM，光能量为0J/cm2;⑤空白微泡组:空白微泡浓度10μM，光能量为3J/cm2;各组按分组要求微泡处理6h后，再光照18h后按要求对细胞AnnexinV-FITC/PI进行双染，用流式细胞仪检测细胞凋亡。
　　结果:
　　第一部分1.竹红菌素修饰的微泡为纳米级，其粒径为(1050.4±323.0)nm，Zeta电位为+(21.3±7.3)mV，包封率为（85.1±4.6）％;空白微泡粒径为(1029.8±134.0)nm，Zeta电位为+(20.9±8.6)mV。
　　2.竹红菌乙素在吸收光谱图上有三个吸收峰，分别为475nm、545nm，在475nm处为最高峰值。
　　第二部分1.细胞中竹红菌素脂质微泡吸收随时间变化而变化，6小时达最佳，6小时后细胞内竹红菌素的含量呈平台且有下降趋势。
　　2.HB微泡联合LED光源照射细胞有明显抑制作用，在一定范围内抑制作用跟HB微泡浓度呈整相关。
　　3.除实验细胞组以外，其余四组凋亡率及死亡率较低，无明显差异(p＞0.05)，其中空白微泡组凋亡率及其死亡率稍高，但仍无统计学意义。实验细胞组凋亡率及其死亡率较高，较其余四组有明显差异，具有统计学意义(p＜0.05)。
　　结论:
　　1.本实验通过机械振荡法成功自制了竹红菌素修饰的纳米脂质微泡。
　　2.竹红菌乙素在激光波长为475nm处为最大吸收，说明在此处竹红菌乙素发挥最大的光动力效应。
　　3.细胞中竹红菌素修饰脂质微泡吸收随时间变化而变化，6小时为最佳。
　　4.HB脂质微泡联合LED光源照射对细胞Tca8113有较为明显的抑制作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 竹红菌素修饰的脂质微泡的制备及其物理性质

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 观察竹红菌修饰的脂质微泡HB脂质微泡联合LED光源照射对人舌癌细胞Tca811的作用

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文总结

附图

参考文献

文献综述 超声载基因微泡在头颈部肿瘤靶向治疗中的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论著