维生素A修饰黄芩素脂质体的制备及初步细胞学研究

摘要

目的：制备维生素A修饰黄芩素脂质体，进行工艺优化及处方验证，考察其理化性质及稳定性;以视黄醇结合蛋白受体高表达的HSC和低表达的HepG2为细胞模型，初步考察VA-BAI-L药理效应及作用机制。
　　方法：采用乙醚注入法制备VA-BAI-L;以黄芩素包封率及维生素A结合率为指标，采用单因素考察及正交试验筛选最优处方;以离心加速实验及4℃储存条件下包封率与结合率的变化评价其稳定性;采用MTT法、流式细胞术考察游离黄芩素、BAI-L、VA-BAI-L对细胞的增殖抑制作用以及对细胞凋亡的影响，采用激光共聚焦显微镜观察荧光染色BAI-L、VA-BAI-L向细胞转运情况。
　　结果：筛选出制备VA-BAI-L最佳处方:EPC与Ch的比例为5∶1、药脂比为1∶25、PBS温度为50℃、PBS pH为6.6，VA用量为7mg(VA与EPC比例为7∶75)。在此最佳工艺条件下，VA-BAI-L黄芩素平均包封率为76.75％，VA平均结合率为64.77％，平均粒径366.2nm; MTT结果显示VA-BAI-L对HSC抑制作用明显快于BAI-L，24h抑制率明显高于阳性对照秋水仙碱、游离BAI及BAI-L，而对于HepG2抑制率则与BAI-L无明显差异;流式细胞术检测细胞凋亡，24h开始VA-BAI-L组HSC细胞凋亡率明显高于其他三组，与MTT实验结果一致;激光共聚焦扫描结果显示，VA-BAI-L作用于HSC4h即呈现较明显荧光，24h荧光强度达到最大，显著高于其它三组。
　　结论：采用葡聚糖凝胶柱分离VA-BAI-L、以UV法检测脂质体的包封率及结合率结果准确、方法简便易行、便于操作;制备的VA-BAI-L粒径分布均匀、性质稳定、具有一定的缓释作用;细胞学研究显示VA-BAI-L对HSC具有一定的靶向性，RBPR介导HSC对VA-BAI-L的摄取。由此可知，经维生素A修饰后能提高HSC对脂质体的摄取率，这为HSC靶向递送药物提供了一种新的思路，具有一定的理论及实际意义。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 维生素A修饰黄芩素脂质体的制备

实验一 黄芩素脂质体包封率测定方法的建立

1 仪器与材料

2 方法与结果

3 小结与讨论

实验二 黄芩素脂质体的制备工艺及处方研究

1 仪器与材料

2 方法与结果

3 小结与讨论

实验三 VA-黄芩素脂质体包封率及结合率测定方法的建立

1 仪器与材料

2 方法与结果

3 小结与讨论

实验四 VA-黄芩素脂质体的制备工艺及处方研究

1 仪器与材料

2 方法与结果

3 小结与讨论

第二部分 维生素A修饰黄芩素脂质体的理化性质及初步稳定性研究

1 仪器与材料

2 方法与结果

3 小结与讨论

第三部分 维生素A修饰黄芩素脂质体初步细胞学研究

1 仪器与材料

2 方法与结果

3 小结与讨论

全文总结

参考文献

综述 受体介导肝细胞靶向药物递送研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的论文