HCC患者中Tim-3/Galectin-9通路对调节性T细胞和CD8+T细胞功能的影响

摘要

目的：通过健康志愿者和肝细胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)患者中Tim-3+Tregs和Tim-3+CD8+T细胞的频率、表型和功能分析，探讨Tim-3在HCC患者肿瘤局部的功能和临床意义。
　　方法：分离健康人和HCC患者外周血单个核细胞（PBMCs）及HCC患者肝组织浸润的单个核细胞，流式检测Tim-3+Treg细胞和Tim-3+CD8+T细胞频率、表型及功能特征，免疫组化检测Foxp3和Galectin-9在肝组织内的表达。
　　结果：CD4+Foxp3+Treg细胞在HCC患者肿瘤局部高度聚集且上调表达共抑制分子Tim-3，Tim-3将CD4+Foxp3highTreg细胞分为两群，Tim-3+CD4+Foxp3highTregs和Tim-3-CD4+Foxp3highTregs；CD4+Foxp3highTim-3+Treg细胞比CD4+Foxp3highTim-3-Treg细胞表达更高频率的功能相关分子（CTLA-4、GITR等）和细胞因子（IL-10、TGF-β），且CD4+Foxp3highTim-3+Treg细胞的频率与肿瘤患者TNM分期呈正相关，提示Tim-3的上调表达加强了肿瘤局部Treg细胞的抑制功能。我们还发现HCC患者肿瘤局部浸润CD8+T细胞也显著上调表达Tim-3分子，且与Tim-3-CD8+T细胞相比，Tim-3+CD8+T细胞分泌功能细胞因子（IFN-γ,IL-2,TNF-α）和细胞毒相关分子（GramzymeB，perforin）显著降低，提示Tim-3的上调表达减弱了肿瘤患者局部CD8+T细胞的抗肿瘤作用。进一步体外实验研究表明Tim-3的配体Galectin-9在体外可以诱导HCC患者外周血PBMC中Treg和CD8+T细胞上调表达Tim-3；同时免疫组化技术显示HCC患者肿瘤局部高表达Galectin-9，免疫荧光显示Galectin-9主要由CD68+细胞表达。
　　结论：HCC患者肿瘤局部聚集了大量抑制功能更加强大的CD4+Foxp3highTim-3+T细胞和抗肿瘤功能减弱的CD8+Tim-3+T细胞。我们的结果提示Tim-3与Galectin-9通路可能通过促进Treg细胞抑制功能和抑制CD8+T细胞细胞毒功能，从而促进HCC的发生及发展。

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1材料与方法

1.1标本来源

1.2主要抗体

1.3主要试剂

1.4主要仪器

1.5标本处理

1.6细胞分离

1.7流式细胞术

1.8免疫组织化学和免疫荧光

2统计学处理

3结果

3.1CD4+Foxp3+ Treg细胞在HCC患者体内明显增加且主要聚集在肿瘤局部

3.2在HCC患者中CD4+Foxp3+Treg细胞上有Tim-3的表达且Tim-3+Treg主要聚集于TILs

3.3 HCC患者TILs中Tim-3+Foxp3+Treg细胞的表型和功能

3.4 HCC患者TILs中CD8+T细胞上有Tim-3的表达，与Tim-3-CD8+T 细胞相比，Tim-3+CD8+T细胞的功能减弱

3.5 HCC患者TILs中高表达的CD4+Foxp3highTim-3+T 细胞与HCC患者的肿瘤分期有正相关

3.6 Galectin-9在HCC患者肿瘤局部的表达增加且可促使Tim-3+Treg的表达增加

4讨论

全文总结

参考文献

文献综述

致谢

攻读硕士学位期间发表的学术论文