Notch信号通路在小鼠椎间盘细胞中的差异表达及调控作用

摘要

目的：
　　探讨Notch信号转导通路相关分子在小鼠脊椎生长发育过程中的差异性表达谱，并进一步研究Notch信号分子Dll-1和Jag-1对BMP-2诱导椎间盘髓核（nucleus pulpous，sNP）细胞体外成软骨分化的影响。
　　方法：
　　采用RT-PCR检测各不同发育年龄段小鼠椎间盘的Notch信号分子表达情况，分析筛选出对调控脊椎正常生长发育的重要信号分子Dll-1、Jag-1，并采用免疫组织化学方法进一步验证。重组腺病毒介导Dll-1、Jag-1、BMP-2在HEK293细胞中包装扩展获得高滴度病毒，将NP细胞分为Ad-GFP+Ad-RFP对照组（A组）、Ad-BMP-2+Ad-RFP组(B组)、Ad-BMP-2+Ad-Dll-1组（C组）、Ad-BMP-2+Ad-Jag-1组（D组），RT-PCR检测BMP2、Dll-1、Jag-1在其中的表达水平，检测软骨细胞特征性产物蛋白聚糖（aggrecan，ACAN）和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ，COL2A1)的表达，甲苯胺蓝染色检测软骨基质分泌情况。
　　结果：
　　1、小鼠脊椎生长发育过程中，Notch信号分子表达总体呈下降趋势，其中Dll-1、Dll-3、Jag-1下降趋势尤其显著，在调节脊椎发生过程中起重要调节作用。
　　2、BMP-2过表达可促进NP细胞成软骨分化，致使ACAN和COL2A1表达增高，甲苯胺蓝染色阳性增强。
　　3、Dll-1、Jag-1二者间有一定的协同刺激表达作用，并且其过表达可显著抑制BMP-2诱导的成软骨分化效应。
　　结论：
　　Notch信号分子尤其是Dll-1、Jag-1在正常脊椎发生过程中发挥重要调节作用，并对椎间盘软骨细胞的成熟分化有明显负性调节作用。为进一步研究Notch信号转导通路与脊椎发育性疾病的关系奠定了重要基础

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

参考文献

第一部分 Notch信号分子在不同发育阶段的小鼠椎间盘细胞中的差异性表达

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 Notch信号对椎间盘软骨细胞调控的研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

文献综述

致谢

攻读学位期间发表论文