抑制性寡脱氧核苷酸对染矽尘小鼠早期炎症的影响及其机制探讨

摘要

矽肺是因长期大量吸入游离二氧化硅(SiO2)粉尘所引起的以肺组织弥漫性纤维化为主要特征的全身性疾病。根据2011年4月18日卫生部向社会公布的《2010年职业病防治工作情况和2011年重点工作》，2010年新发职业病27240例，其中尘肺病23812例。目前尘肺病仍是我国最严重的职业病，2010年报告的尘肺病例数占职业病报告总例数的87.42％。有专家调查发现，能够做职业病诊断并在疾控中心登记的，仅为尘肺病患者的10％-20％，因此估计尘肺病实际发生的病例数不少于100万人。因此，进一步探讨矽肺的发病机制和寻找新型的治疗药物对矽肺的预防、治疗乃至最终消除矽肺具有重要的意义。目前的研究表明，T淋巴细胞由树突状细胞和巨噬细胞等抗原递呈细胞处理修饰二氧化硅后激活。虽然Th1/Th2极化在矽肺的发病机制中仍不完全明确，但研究表明，Th1型细胞因子在矽肺的炎症阶段起主要作用，而Th2型细胞因子在矽肺的纤维化阶段起主要作用。IFN-γ(γ-干扰素，Interferon-γ)具有促进初始T淋巴细胞向Th1型细胞分化以及活化巨噬细胞和NK细胞的作用，是典型的Th1型细胞因子。Th1型细胞的分化成熟需要IFN-γ依赖的信号转导子和转录激活子1(STAT1)STAT1和STAT4的磷酸化信号级联反应。实验研究证实，富含重复“TTAGGG”基序的抑制性寡核苷酸(Sup ODN)具有下调Th1型细胞因子和前炎症介质产生的作用。因此，可以将这类ODN用于矽肺的研究中，观察其对矽肺早期炎症的影响，以及炎症细胞因子的产生影响。
　　 研究目的:观察Sup ODN对染矽尘小鼠早期炎症的影响，探讨Sup ODN作用机制并评价其应用价值。
　　 研究方法:雌性Balb/c小鼠60只随机分4组，分别为空白对照组、矽尘组、Sup ODN组、对照寡核苷酸(Con ODN)组。除空白对照组气管注入0.1mL生理盐水外，其余各组采用气管暴露法一次性注入0.1mL SiO2悬液(5g/L)，Sup ODN组和Con ODN组在造模前3h分别腹腔注射Sup ODN、Con ODN各0.3mL(1 mg/mL)。以建模术时为0d记，模型建立7d后处死动物，采用瑞氏染色作血清白细胞分类计数;ELISA法检测血清IFN-γ和TNF-α水平;免疫组织化学法检测肺组织中IFN-γ和pSTAT4的表达，并作定量分析;HE染色观察肺组织病理变化;天狼猩红染色观察肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。
　　 研究结果:
　　 1.HE染色证实气管暴露注入二氧化硅粉尘悬液成功建立了小鼠矽肺模型。
　　 2.Sup ODN组与矽尘组、Con ODN组相比，血清中IFN-γ表达明显降低;矽尘组小鼠肺组织间隔水肿并增厚，Sup ODN组小鼠肺组织炎症较矽尘组减轻;与空白对照组比较，矽尘组小鼠肺组织中IFN-γ表达增加，与矽尘组比较，Sup ODN组小鼠肺组织内IFN-γ表达减少;与空白对照组比较，矽尘组小鼠肺组织中pSTAT4表达显著增加，与矽尘组比较，Sup ODN组小鼠肺组织内pSTAT4表达显著减少。
　　 研究结论:
　　 1.矽尘可诱导染矽尘小鼠血清中IFN-γ和TNF-α表达增加，SupODN可减少染矽尘小鼠IFN-γ的产生，而对TNF-α无影响。
　　 2.Sup ODN可能通过抑制IFN-γ和pSTAT4的表达，抑制小鼠Th1型免疫应答，最终实现其对染矽尘小鼠肺炎症的保护作用。综上所述，本研究结果初步表明Sup ODN对染矽尘小鼠早期炎症有一定的阻碍作用，为矽肺炎症的防治及辅助治疗，开拓了新的途径。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 材料与技术路线

1．2 实验方法

1．3 数据的统计学分析

2 结果

2．1 小鼠肺组织标本肉眼观

2．2 血清IFN-γ、TNF-α表达

2．3 白细胞分类计数

2．4 肺组织HE染色

2．5 IFN-γ在肺组织中的表达

2．6 pSTAT4在肺组织中的表达

2．7 小鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原天狼猩红染色

3 讨论

3．1 动物模型的建立

3．2 Sup ODN对染矽尘小鼠IFN-γ的影响及机制

3．3 Sup ODN对染矽尘小鼠pSTAT4的影响及机制

3．4 研究的局限性及进一步优化

参考文献

综述 抑制性寡脱氧核苷酸对矽尘所致肺泡炎的作用机制及应用

致谢

攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文