OLFM4mRNA与核仁素蛋白的相互作用研究

摘要

目的:嗅觉介导素4(OLFM4)基因又称为GW112，hGC-1，在多种肿瘤中高表达，研究表明OLFM4在肿瘤发生发展中起重要作用，但结果并不一致，这显示OLFM4的作用存在细胞和组织特异性。本研究主要探讨OLFM4 mRNA与核仁素（Nucleolin，C23或NCL）蛋白之间是否存在相互作用，以及核仁素对OLFM4转录水平的调控。
　　 方法:构建过表达核仁素质粒GC146-Ncl和阴性对照质粒GV-142以及敲低核仁素质粒pGenesil-1.1-Si和敲低阴性对照质粒pGenesil-1.1-HK，分别转染SGC-7901和293-T细胞，用western blot鉴定C23蛋白表达水平。将上述质粒分别与OLFM4-报告基因质粒共转染，分析核仁素对OLFM4活性的影响。收集SGC-7901细胞核染色质，孵育细胞核染色质和核仁素，进行蛋白质-RNA免疫共沉淀后，提取RNA，用RT-PCR检测与蛋白质结合的mRNA类型。
　　 结果:构建的过表达质粒GC146-Ncl和阴性对照质粒GV-142以及敲低(knock down)质粒pGenesil-1.1-Si和敲低阴性对照质粒pGenesil-1.1-HK，分别转染细胞，48h后荧光率达60％。western blot结果显示，核仁素过表达组中核仁素表达上调，核仁素敲低组中核仁素表达下调，分别与它们的阴性对照组相比。双荧光素酶报告基因实验结果显示，SGC-7901细胞中过表达质粒GC146-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.15倍，敲低质粒pGenesil-1.1-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.8倍;293-T细胞中过表达质粒GC146-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.7倍，敲低质粒pGenesil-1.1-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.5倍。确定了合适的超声波破碎条件:即输出功率40％，每次1s，间隔30s，共30次。蛋白质-RNA免疫共沉淀后RT-PCR结果显示，扩增出OLFM4基因490 bp片段和Bcl-2基因153bp片段。
　　 结论:核仁素与OLFM4 mRNA可以相互结合，且核仁素可以通过增加OLFM4转录水平和延长OLFM4 mRNA的半衰期来增加OLFM4 mRNA的稳定性。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 核仁素对OLFM4活性的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 OLFM4与核仁素结合鉴定实验

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 OLFM4基因在肿瘤发生中的作用

致谢

攻读硕士期间参与发表的学术论文及参与的课题