Gadd45α对滋养细胞功能的调控及其在子痫前期发病中的作用机制研究

摘要

目的:检测生长阻滞和DNA损伤45α(Growth arrest and DNAdamage45 alpha，Gadd45α)在正常早孕期绒毛组织、蜕膜组织的表达和定位;研究Gadd45α在调控人滋养细胞迁移和侵袭中的作用和可能的机制;采用缺氧复氧体外构建绒毛外滋养细胞的氧化应激损伤模型，探讨Gadd45α及其下游信号通路p38 MAPK在滋养细胞功能损伤和子痫前期发病中的可能作用，进一步明确相关分子机制，为子痫前期的治疗提供新的靶点和理论依据。
　　方法:(1)免疫组化法检测Gadd45α蛋白在人类早孕期绒毛和蜕膜组织中的表达和定位。(2)通过转染慢病毒颗粒，干扰绒毛外滋养细胞HTR8/SVneo和早孕绒毛外植体的Gadd45α基因表达。(3)采用PCR和western blotting检测干扰效率。(4)Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验检测干扰Gadd45α对HTR8/SVneo细胞迁移和侵袭能力的影响。(5)采用早孕绒毛外植体培养模型研究Gadd45α对绒毛外滋养细胞外生性迁移的影响。(6)明胶酶谱法检测外植体和细胞培养上清液中MMPs的活性，western blotting检测MMPs的组织抑制因子TIMPs的蛋白表达水平。(7)体外通过缺氧复氧构建绒毛外滋养细胞氧化应激损伤模型，检测细胞内活性氧的含量、细胞凋亡率，及绒毛外滋养细胞体外迁移、侵袭及管腔成型的能力及细胞培养上清液中MMPs的活性和sFlt-1& sEng的分泌，并观察干扰Gadd45α基因及阻断其经典下游信号通路p38 MAPK对缺氧/复氧所致的绒毛外滋养细胞生物学功能的影响，进一步明确Gadd45α调控滋养细胞功能在子痫前期发病中的作用及可能机制。
　　结果:(1)正常早孕期绒毛组织和蜕膜组织中均有Gadd45α蛋白表达，在绒毛组织主要定位于滋养细胞柱和合体滋养细胞;在蜕膜组织的腺上皮细胞和EVT中高表达，蜕膜间质细胞低表达。Gadd45α的表达在早孕期各孕周间无统计学差异。(2)敲减Gadd45α可以促进绒毛外滋养细胞迁移和侵袭能力，而对细胞增殖和凋亡无明显影响。(3)Gadd45α抑制滋养细胞的迁移和侵袭可能是通过降低MMP2和MMP9的活性，增加TIMP1和2的表达来实现的。(4)缺氧/复氧处理可以导致绒毛外滋养细胞迁移、侵袭和管腔形成能力下降，同时HTR8/SVneo细胞中Gadd45α的表达上调、p38 MAPK磷酸化增加，伴有上清液中MMPs活性的下降及sFlt-1& sEng的分泌增加，为研究Gadd45α参与子痫前期发病的机制研究提供了简便、可靠的体外模型。(5)转染慢病毒干扰Gadd45α的基因表达和p38 MAPK特异性的抑制剂SB203580阻断p38信号通路均可以有效地促进缺氧/复氧损伤所致的绒毛外滋养细胞的体外迁移/侵袭和管腔成型能力，减少抗血管生成因子sFlt-1&sEng的分泌，这可能是通过调控MMP2和MMP9的活性、减少氧化应激来实现的。
　　结论:(1) Gadd45α作为一个负性调节因子在滋养细胞侵袭和早期胎盘发育过程中发挥着重要的作用，这可能是通过直接或间接地调控基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的活性来实现的。(2)在绒毛外滋养细胞中存在着这样一条信号通路:氧化应激损伤—Gadd45α↑—p38MAPK磷酸化↑—滋养细胞功能损伤和sFlt-1& sEng的分泌↑，证实了Gadd45α通过p38 MAPK信号通路参与子痫前期胎盘形成过程中的滋养细胞侵袭和血管重铸。(3) Gadd45α的RNAi和p38 MAPK特异性抑制剂SB253580可促进H/R下滋养细胞的迁移、侵袭能力及血管生成能力，从而改善子痫前期胎盘浅着床和螺旋动脉重铸异常情况，为子痫前期的治疗提供了新的思路。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

参考文献

第一部分 Gadd45 α在早期胎盘发育过程中的可能作用

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

第二部分 Gadd45α对绒毛外滋养细胞迁移和侵袭的调控

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

第三部分 Gadd45α调控滋养细胞功能在子痫前期发病中的作用机制研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨论

5 小结

参考文献

文献综述 胎盘滋养细胞在人类妊娠中的作用

致谢

攻读博士学位期间发表的学术论文

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