组蛋白乙酰化酶p300对阿尔茨海默病细胞模型中PS1、BACE1启动子乙酰化的调节作用

摘要

表观遗传调节在阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）病理机制中起重要作用，其中组蛋白乙酰化修饰的作用尤为突出。大量研究证实AD的全组蛋白低乙酰化介导了记忆基因的表达，却少有AD相关基因，如早老素1(PS1)或淀粉样前体蛋白(APP)β-剪切酶(BACE1)的组蛋白乙酰化等相关研究报道。我们利用转入Swedish突变的人APP695的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞(N2a/APPswe)和转入野生型人APP695的N2a细胞(N2a/APPwt)，作为AD的细胞模型，检测了PS1、BACE1基因启动子的组蛋白乙酰化水平。
　　结果表明相对于N2a/APPwt细胞与空载体N2a/wt细胞，N2a/APPswe细胞中的PS1、BACE1基因启动子的组蛋白呈高乙酰化水平，与PS1、BACE1的表达上调一致，另外，组蛋白乙酰化酶（Histone acetylase，HATs）腺病毒E1A相关蛋白p300也明显升高。我们还证明了在N2a/APPswe细胞中，p300可与PS1、BACE1基因启动子相结合。但是，与N2a/wt细胞比较，N2a/APPwt细胞中PS1、BACE1启动子组蛋白乙酰化水平与p300蛋白无明显变化。我们利用p300的HAT选择性抑制剂姜黄素处理N2a/APPswe细胞发现，PS1、BACE1组蛋白乙酰化水平较前明显降低，PS1、BACE1的表达量也相应下降。我们的研究结果提示组蛋白乙酰化酶p300通过调节AD相关基因启动子区域的组蛋白乙酰化水平，进一步调控基因的转录及表达。组蛋白乙酰化酶p300在AD病理的表观调节作用为家族性AD的防治提供了新思路。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 材料与仪器

1．1 材料

1．2 主要实验仪器设备

2 实验方法

2．1 细胞培养

2．2 药物干预

2．3 酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoabsorbent Assay，ELISA)检测Aβ1-40及Aβ1-42水平

2．4 荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测PS1、BACE1的mRNA水平

2．5 Western blotting检测PS1、BACE1，p300，Ac-H3，H3的表达

2．6 酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunoabsorbent Assay，ELISA)检测HATs酶活性水平

2．7 染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP)检测PS1、BACE1启动子组蛋白H3乙酰化水平及p300结合水平

2．8 免疫荧光染色(Immunofluorescence，IF)观察p300的表达

2．9 统计学分析

3 结果

3．1 N2a／APPswe和N2a／APPwt细胞中的PS1、BACE1表达水平，及其下游的Aβ水平明显增高

3．2 N2a／APPswe细胞PS1、BACE1启动子组蛋白H3，以及全细胞组蛋白H3的乙酰化水平增高

3．3 N2a／APPswe细胞中的内源性p300蛋白明显增高，并与PS1、BACE1启动子直接结合

3．4 在N2a／APPswe细胞中，p300特异性抑制剂姜黄素抑制PS1、BACE1启动子乙酰化水平

4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 阿尔茨海默病中的组蛋白乙酰化调节

致谢

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