PLCε通过PKCα/βTBX3/E-cadherin信号通路调节膀胱癌细胞的侵袭和迁移

摘要

第—部分 PLCε shRNA通过PKCα/β/T BX3/E-cadherin信号通路抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移
　　目的:体外实验研究PLCε调节膀胱癌细胞侵袭和迁移的分子机制。
　　方法:各处理因素作用于膀胱癌细胞株T24、BIU-87细胞后，采用划痕，transwell迁移、侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力;QRT-PCR检测TBX3，E-cadherin的mRNA表达水平;Western blot检测PLCε，PKCα，PKCβ，p-PKCα，p-PKCβ，TBX3和E-cadherin的蛋白表达水平;IHC检测膀胱癌组织中PLCε，PKCα，PKCβ的蛋白表达水平。
　　结果:划痕，transwell迁移、侵袭实验显示:Ad-shPLCε能够抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力。Western blot结果显示Ad-shPLCε使PKCα、PKCβ在细胞膜的分布减少，降低PKCα、PKCβ的磷酸化水平。Western blot和IHC结果显示:PLCε高表达膀胱癌组织与PLCε低表达的膀胱癌组织相比较，PKCα、PKCβ的磷酸化水平及在细胞膜的表达升高。Western blot和QRT-PCR结果显示:Ad-shPLCε能够抑制TBX3的mRNA、蛋白表达，促进E-cadherin的mRNA、蛋白的表达。Ad-shPLCε联合运用pGenesil-shTBX3处理细胞后，能够进一步增加E-cadherin的表达，抑制细胞的迁移;Ad-shPLCε联合PKCα、PKCβ的特异性抑制剂GO6976处理细胞后，较Ad-shPLCε处理组，TBX3表达降低，E-cadherin表达增高，细胞的迁移、侵袭能力受到明显的抑制;Ad-shPLCε联合PKC激活剂PMA处理细胞后，能够减少Ad-shPLCε对细胞的迁移、侵袭能力得抑制作用，并能部分增加TBX3的蛋白表达及部分降低E-cadherin的蛋白表达水平。
　　结论:PLCε shRNA能够通过PKCα/β/TBX3/E-cadherin通路抑制膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力。
　　第二部分 PLCε shRNA对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响及抑制膀胱癌侵袭和迁移机制的验证
　　目的:体内实验研究PLCε shRNA对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响及验证PLCε shRNA抑制膀胱癌侵袭和迁移的机制
　　方法:将感染Ad-shPLCε，Ad-HK及空白膀胱癌T24细胞分别种植于随机分的三组裸鼠皮下（每组3只），形成膀胱癌皮下移植瘤，并定期监测裸鼠体重及瘤体体积，四周后处死裸鼠，切取瘤体，切片行H&E染色及免疫组化检测PLCε，ki67，p-PKCα，p-PKCβ，TBX3和E-cadherin的蛋白表达情况。
　　结果:以3×106T24细胞种植于裸鼠皮下成功成瘤，感染Ad-shPLCε T24细胞处理组肿瘤重量明显小于空白组及Ad-HK组，差异有统计学意义(p＜0.05);免疫组化结果显示，Ad-shPLCε处理组与空白组、Ad-HK处理组比较，E-cadherin表达升高，PLCε，ki67，p-PKCα，p-PKCβ，TBX3表达降低。
　　结论:PLCε shRNA能够抑制裸鼠皮下瘤的生长，并上调E-cadherin及下调ki67，p-PKCα，p-PKCβ，TBX3的表达。

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英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 PLCε shRNA通过PKCα／β／TBX3／E-cadherin信号通路抑制膀胱癌细胞的侵袭和迁移

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二部分 PLCε shRNA对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响及抑制膀胱癌侵袭和迁移机制的验证

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 转录抑制因子T-box3(TBX3)：潜在的抗肿瘤治疗分子靶标

致谢

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