磁标记兔脂肪干细胞与建立兔腰椎间盘退变模型及MR定量的研究

摘要

第一部分兔脂肪间充质干细胞的培养鉴定及体外磁标记MR成像
　　目的:研究兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)的培养鉴定方法，联合应用超顺磁性氧化铁(SPIO)和多聚赖氨酸(PLL)行体外磁标记细胞，并探讨磁标记示踪的可行性。
　　方法:分离、纯化并培养兔ADSCs，流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD90、CD44和CD34。应用SPIO-PLL标记细胞，普鲁士蓝染色和透射电镜检测胞内铁粒子。体外3.0T MR分别对1×107个未标记细胞，经25、50、75μ g/ml SPIO-PLL标记的1×107个细胞;1×107个ADSCs(标记1d)、1×107个（标记3d）和5×106个（标记1d）进行成像，包括T1WI、T2WI及T2*WI序列，并测量各组的信号强度和弛豫时间。
　　结果:第3代ADSCs纯度高、排列规则、细胞呈漩涡状，流式结果示CD44和CD90阳性表达率分别为99.2％、98.7％，CD34表达阴性。普鲁士蓝染色和透射电镜示胞浆内蓝色颗粒，磁标记率近100％。MR示随着SPIO-PLL的浓度增高，T2*WI和T2WI序列的信号强度变化较T1WI明显。1×107个ADSCs(标记1d)的信号强度变化率较1×107个（标记3d）和5×106个（标记1d）大，T2*和T2弛豫时间与T1弛豫时间相比均有统计学意义(F=161.47，P＜0.05)，但T2*和T2弛豫时间相比差异无统计学意义(F=5.88，P＞0.05)。
　　结论:通过分离纯化培养可获得足量的ADSCs，SPIO-PLL能够有效标记ADSCs，体外可行MR细胞成像，以T2*WI和T2WI序列敏感。
　　第二部分髓核针刺抽吸法建立兔腰椎间盘退变模型及MR定量研究
　　目的:建立兔腰椎间盘退变模型并提高其退变机制的认识。
　　方法:18只新西兰大白兔，侧后方入路手术暴露腰椎间盘，18G穿刺针抽吸12只L2/3、L3/4、L4/5髓核，各约5mg，正常L1/2、L5/6和另6只L2-5间椎间盘分别为组内和组间对照。术后第4、8、12周行MR矢状位T2WI和T2-mapping序列检查，取正中矢状面观察各椎间盘的信号并测量T2弛豫时间并与正常组比较。相应各时间点取2只L1-6间椎间盘行HE和Masson染色，观察纤维环形态、髓核细胞及基质的变化并与正常组比较。
　　结果:椎间盘为一豆点大隆起，18G穿刺针经脊柱旁路于横突根部可成功穿刺抽吸髓核。正常椎间盘T2WI序列为均匀高信号，实验组随时间延长信号逐渐降低，第8周明显降低，第12周基本完全呈低信号;第8周实验组与正常组T2弛豫时间差异有统计学意义（p＜0.05)。术后随时间进展，HE和Masson染色示椎间盘细胞和胶原逐渐减少，纤维环和髓核分界不清;第8周髓核基质退变纤维化，几乎被纤维组织取代;第12周椎间盘纤维软骨化，局部形成软骨。
　　结论:髓核针刺抽吸法可成功建立兔腰椎间盘退变模型，MR可实时定量监测退变程度，为椎间盘退变机制的动物实验研究提供可靠的模型及影像学监测方法。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

参考文献

第一部分 兔脂肪间充质干细胞的培养鉴定及体外磁记MR成像

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

参考文献

附图与说明

第二部分 髓核抽吸法建立兔腰椎间盘退变模型及胀定量研究

1 材料和方法

2 结果

3．讨论

4 小结

参考文献

附图与说明

文献综述 干细胞修复退变椎间盘组织的研究现状及进展

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果