cAMP-PKA-pCREB信号通路介导康复训练促进脑缺血后大鼠的运动功能恢复

摘要

目的:康复训练是是目前缺血性脑卒中恢复期促进神经功能恢复的有效治疗措施之一。研究证实缺血性脑卒中后给予针对性的功能训练和活动有利于缺损神经功能的恢复，提高患者的日常生活质量[1-3]。同时cAMP-PKA-pCREB信号通路的激活可明显促进损伤轴突再生[4-6]，改善CNS损伤后的神经功能障碍。因此，为求进一步探索康复训练促进缺血性卒中后的神经功能恢复机制是否与cAMP-PKA-pCREB信号通路的激活促进损伤轴突再生有关，我们拟以cAMP-PKA-pCREB这条信号通路为切入点，通过观察康复训练对脑梗死后大鼠脑组织内cAMP、总PKA含量以及PKAc、pCREB蛋白表达变化的影响，结合轴突再生标志物GAP-43蛋白表达变化的检测和平衡木试验对实验性大鼠运动功能的评价，阐述cAMP-PKA-pCREB信号通路在康复训练促进脑梗死后大鼠的运动功能恢复过程中的具体作用，为临床康复治疗提供新的理论支持。
　　方法:采用成年健康的SD雄性大鼠，参照Longa改良线栓法进行大脑中动脉缺血灌注(MACO)模型的制备，缺血2h后再灌注。模型成功的大鼠随机分为自然恢复组、自然恢复+Rp-cAMP组、康复训练组和康复训练+Rp-cAMP组，PKA抑制剂Rp-cAMP于侧脑室注射后立即进行MACO模型的制备。同时设立假手术组。康复训练的实验性大鼠均于术后48 h开始训练。时间点设立为术后2d、7d、14d和21d。通过酶联免疫法检测脑组织内cAMP、总PKA的含量变化，Western Blot检测脑组织内PKAc、pCREB蛋白的表达变化，同时采用免疫组化法进行pCREB、PKAc、GAP-43蛋白表达的定位检测及GAP-43蛋白表达的半定量分析，应用平衡木试验对实验性大鼠进行运动功能评价。
　　结果:(1)运动功能评分结果:自然恢复组大鼠的平衡木试验评分低于自然恢复+Rp-cAMP组;康复训练组大鼠明显低于自然恢复组，也低于康复训练+Rp-cAMP组;(2)脑组织内cAMP、总PKA的含量和PKAc、pCREB蛋白表达的结果:自然恢复组大鼠高于自然恢复+Rp-cAMP组，康复训练组大鼠明显高于自然恢复组，也高于康复训练+Rp-cAMP组;(3)脑组织GAP-43蛋白表达结果:自然恢复组大鼠高于自然恢复+Rp-cAMP组，康复训练组大鼠明显高于自然恢复组，也高于康复训练+Rp-cAMP组。以上改变均于术后14d最为明显。
　　结论:(1)脑组织缺血后脑组织内cAMP、总PKA的含量增加，PKAc及其下游pCREB蛋白的表达也增强，同时GAP-43蛋白表达也随之明显增加。(2)康复训练可明显增加脑组织cAMP、总PKA的含量，促进PKAc、pCREB蛋白的表达，同时GAP-43蛋白的表达也随之明显增加。(3)侧脑室注射Rp-cAMP可可明显抑制MACO大鼠脑组织内总PKA、PKAc和pCREB蛋白的表达，并明显的拮抗了康复训练对以上指标的促进作用。(4)康复训练可明显改善MACO大鼠的运动功能。(5)侧脑室注射Rp-cAMP可明显减弱康复训练对运动功能的改善作用。这些研究发现提示，cAMP-PKA-pCREB信号通路的激活促进损伤轴突再生参与了脑缺血后的神经功能的自然恢复，同时也是康复治疗促进脑缺血后大鼠神经功能恢复的可能机制之一。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 统计学分析处理

结果

1 实验性大鼠的运动功能评分

2 指标检测结果

讨论

1 脑缺血后大鼠cAMP-PKA-pCREB信号蛋白表达及意义

2 康复训练对MACO大鼠运动功能的影响

3 康复训练对脑缺血后大鼠的cAMP-PKA-pCREB信号蛋白表达的影响及意义

小结

附图

参考文献

文献综述 丰富康复训练对脑梗死后神经功能恢复的影响

致谢

攻读硕士学位期间发表论文目录