SOS1对高转移潜能卵巢癌Hey细胞恶性生物学行为的影响及机制探究

摘要

目的：探讨SOS1对高转移潜能卵巢癌Hey细胞恶性生物学行为的影响及机制。
　　方法：1.体外实验：免疫荧光检测 SOS1表达缺失的 Hey细胞（ Hey-SOS1i）、转染阴性对照细胞（ Hey-NT）及空白对照细胞（Hey-WT）三组细胞形态、骨架蛋白、细胞伪足及细胞间排列情况；Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力；粘附实验检测细胞与基质间粘附；内渗及外渗实验反应侵袭能力;MTT和平板克隆检测细胞生长，同时检测细胞周期和凋亡。2.体内实验：构建裸鼠皮下移植瘤模型及腹腔种植转移模型，体内验证生长及转移情况。3.机制探究：1定量PCR检测E钙黏蛋白、N钙黏蛋白、波形蛋白、MMP9、MMP2、snail、twist、Slug的RNA表达；2.Western Blot检测上述蛋白及调控EMT的信号通路中关键蛋白表达；3.免疫荧光检测snail的细胞核定位。
　　结果：1.与Hey-NT、Hey-WT细胞相比，Hey-SOS1i细胞失去极性，骨架蛋白稀疏、排列较紊乱，细胞突出的伪足减少而细胞之间排列紧密；迁移(90.00±2.45 vs.274.67±8.18 vs.254.00±2.16, P<0.01)、侵袭细胞数减少（24.00±1.25 vs.112.33±2.54 vs.102.00±8.94, P<0.01）；细胞基质粘附能力下降（0.31±0.10 vs.0.72±0.10 vs.0.69±0.13，P<0.05）；血管内渗细胞数（13.00±1.63 vs.27.33±1.24 vs.24.00±2.16，P<0.05）及外渗细胞数（9.00±2.16 vs.27.22±1.69 vs.32.33±1.05，P<0.05）显著减少,细胞增殖能力及克隆形成率下降（013±0.10 vs.0.36±0.02 vs.0.41±0.06， P<0.05）；细胞增殖指数下降（0.36±0.01 vs.0.49±0.01vs.0.51±0.05， P<0.05）；总的凋亡细胞数较少，凋亡细胞比例（3.52％±0.05%vs.5.64%±2.37% vs.3.11%±0.55%，P>0.05），及尾部面积（45.86±12.81vs.47.24±10.48 vs.43.58±14.01，P>0.05）无显著差异。应用肿瘤细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型，种植35天后，Hey-SOS1i移植瘤体积和质量（0.74±0.16cm3，0.73±0.20 g），均显著低于Hey-NT组体积和质量（2.18±1.46cm3，2.31±0.98g）（P<0.05）。在腹腔种植模型中，腹腔注射肿瘤细胞5周后，Hey-SOS1i细胞在腹腔总的的转移种植病灶数明显下降（83.33±17.06 vs.49.33±5.65，P<0.05），主要表现为肠道及其系膜（58.67±10.53 vs.33.0±4.32，P<0.05）和横膈（16.67±3.21 vs.10.33±0.58，P<0.05）转移灶减少。与 Hey-NT、Hey-WT细胞相比， Hey-SOS1i细胞上皮标志物 E钙黏蛋白基因和蛋白表达明显增加，间皮标志物 N钙黏蛋白、波形蛋白、MMP2、MMP9、snail基因和蛋白表达均明显减少，核内snail的量减少而胞质内表达相对增加，同时磷酸化的NF-kB下降而NFKBIA表达上调。
　　结论：在高转移潜能卵巢癌Hey细胞中，SOS1可能通过Ras/AKT/NF-KB信号通路或非催化活性依赖的方式影响Snail转录活性而调控EMT过程，进而调节高转移潜能上皮性卵巢癌（EOC）细胞增值和侵袭。

目录

封面

目录

英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 SOS1对卵巢癌Hey细胞增殖、粘附及侵袭的影响

1材料和方法

2 结果

3 讨论

4 结论

第二部分 SOS1对Hey细胞裸鼠皮下移植瘤生长及腹腔内种植转移的影响

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 结论

第三部分 SOS1对高转移潜能Hey细胞EMT过程的影响和机制探究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 结论

全文总结

参考文献

文献综述:NF-kB与上皮间质转化研究进展

致谢

在校期间发表的论文和参与的科研项目