大鼠视皮层发育中tPA的表达及其在视皮层可塑性中的作用研究

摘要

目的:
　　1.探讨出生后的Long Evans大鼠视皮层组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator，tPA）与小清蛋白（parvalbumin，PV）、神经元周围网络（perineuronal nets，PNs）三者发育性共表达的关系及其与视皮层发育可塑性的相关性。
　　2.短期黑暗暴露（dark exposure，DE）即可恢复成年大鼠的眼优势柱可塑性，但具体机制尚不清楚，探讨正常饲养和黑暗暴露的成年大鼠视皮层发育过程中tPA、PNs、谷氨酸脱羧酶67（glutamic acid decarboxylase67，GAD67）的表达和分布特点以及tPA的活性变化，从而探讨tPA在视皮层可塑性中的可能作用。
　　方法:
　　1.应用免疫荧光组织化学技术对生后3（关键期起始）、4（高峰）、5（后期）、7（终止）、9（成年）周龄（PW）的Long Evans大鼠视皮层分别进行tPA、NeuN、DAPI和tPA、PV、PNs三重标记以检测它们的表达随发育的时空关系。
　　2.应用免疫荧光组织化学技术对正常大鼠和长期（10d）黑暗暴露的大鼠视皮层分别进行tPA、GAD67、PNs的免疫荧光染色标记，应用蛋白免疫印记法检测两组tPA及GAD67的表达变化情况，用产物显色分析法分析两组tPA的活性变化。
　　结果:
　　1.tPA+PNs阳性细胞密度在4周龄显著增加达高峰，随后在9周龄显著减少，tPA+PV和PV+PNs阳性细胞密度在3周龄已达峰值并维持至4周龄，在5周龄显著减少至最低水平，随后显著增加至成年高水平；
　　2.tPA+PV/tPA和PV+PNs/PNs比值在3周龄已达最大值，在5周龄显著降至最低，随后显著上升至成年水平；tPA+PV+PNs阳性细胞密度在可塑性关键期的高峰期即4周龄出现峰值；
　　3.黑暗暴露组的大鼠与正常饲养组大鼠相比，tPA阳性细胞及蛋白表达明显增多而GAD67阳性细胞及蛋白表达明显减少，PNs阳性细胞也显著减少，tPA酶活性明显增高。
　　结论:
　　1.各双标细胞的细胞密度的发育及细胞比例的变化情况提示PV阳性神经元分泌tPA的减少可能是导致可塑性减弱的原因之一，PNs对PV的包绕随发育的变化可能是PNs参与关键期终止的结构基础，tPA、PV、PNs三者共同参与视皮层可塑性的发育，相互作用并保持相对平衡；
　　2.我们首次发现了tPA+PV+PNs阳性细胞的存在，虽然其阳性细胞数量很少，但其细胞密度在可塑性关键期的高峰期出现峰值提示被PNs包绕的具有分泌tPA功能的PV阳性神经元可能与关键期可塑性的增强有关；
　　3.与正常饲养组大鼠相比，黑暗暴露组的大鼠tPA阳性细胞及蛋白表达明显增多及活性的明显增高而GAD67阳性细胞及蛋白表达明显减少及PNs阳性细胞的显著减少说明与PNs的降解相关的tPA表达增多及活性增强以及后续GABA水平的降低对于重新激活黑暗暴露的成年大鼠眼优势柱可塑性可能具有重要意义。

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前言

第一部分 大鼠视皮层tPA、PNs、PV的发育性共表达关系及其与视皮层可塑性关键期的相关性

1 材料和方法

1.1 实验动物及分组

1.2 主要试剂及仪器

1.3 实验方法

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 tPA在视皮层的定位

2.1 tPA、PV、PNs共表达情况

3讨论

第二部分 tPA在黑暗暴露的成年大鼠视皮层可塑性中的作用研究

1材料和方法

1.1实验动物及分组

1.2主要试剂及仪器

1.3 实验方法

1.4 统计学分析

2 结果

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述: tPA通过PNs参与视皮层可塑性关键期的研究进展

致谢

硕士期间发表的论文