PCDH10增强表阿霉素杀伤多发性骨髓瘤细胞作用及机制研究

摘要

目的：探讨PCDH10对表阿霉素杀伤多发性骨髓瘤细胞的影响及机制。
　　方法：脂质体转染法恢复PCDH10在MM细胞中的表达，并用RT-PCR、Western blot检测转染效果。表阿霉素作为处理药物：CCK-8法检测不同药物浓度对RPMI8226细胞增殖的影响，求得IC50；以SDF-1α作趋化因子，Transwell法检测药物对RPMI8226细胞迁移侵袭能力的影响并总结出最佳观察时间点。实验设空质粒组、（空质粒+表阿霉素）组、PCDH10组、（ PCDH10+表阿霉素）组：Transwell实验检测PCDH10对药物所致细胞迁移的影响；流式细胞术检测CXCR4的表达；Western blot方法检测RhoA、MMP-9蛋白的表达情况；免疫荧光法和Western blot法检测RPMI8226细胞自噬情况。
　　结果： PCDH10质粒被基因成功转染入RPMI8226细胞，并稳定表达。CCK-8结果显示：随着表阿霉素浓度的增加其对RPMI8226细胞增殖的抑制作用逐渐增强，PCDH10组表阿霉素IC50为(0.87±0.07)μg/ml，明显低于空质粒组(1.27±0.02)μg/ml（P<0.05）。Transwell实验结果显示：表阿霉素可促进RPMI8226细胞迁移，6 h为最佳观察时间点；给药组迁移至小室外的细胞数明显增多（P<0.05）；PCDH10组小室外细胞数明显减少（P<0.05）；而在PCDH10表达的情况下，给药与否对细对小室外细胞数无明显影响。流式细胞术、Western blot结果示：空质粒+表阿霉素组CXCR4、RhoA和MMP-9蛋白表达率均高于空质粒组（ P<0.05），但是在 PCDH10基因表达组上述蛋白的表达量下降（P<0.05）；荧光显微镜下见空质粒+表阿霉素组细胞出现明显自噬荧光颗粒，而PCDH10+表阿霉素组细胞未见明显荧光颗粒；Western blot结果显示：（PCDH10+表阿霉素）组自噬相关蛋白LC3-II表达水平明显低于（空质粒+表阿霉素）组（P>0.05）。
　　结论：PCDH10一方面通过抑制MM细胞自噬提高其对表阿霉素的敏感性；另一方面通过抑制MM细胞CXCR4、RhoA、MMP-9蛋白表达减少细胞对表阿霉素杀伤的逃避，从而增强表阿霉素抗MM效应。

目录

英文缩写对照表

前言

1.1 材料

1.2 实验方法

1.3 统计学方法

2结果

2.1 PCDH10成功转染入RPMI8226细胞并成功表达

2.2 PCDH10增强表阿霉素对RPMI8226细胞的增殖抑制作用

2.3 PCDH10减少表阿霉素所致的RPMI8226细胞迁移

2.4 PCDH10下调经表阿霉素处理RPMI8226细胞CXCR4表达

2.5 PCDH10下调经表阿霉素处理RPMI8226细胞RhoA和MMP-9蛋白表达

2.6 PCDH10抑制表阿霉素诱导的RPMI8226细胞自噬

3讨论

全文总结

参考文献

文献综述:PCDH10基因与肿瘤研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文