C/EBPβ介导β-catenin信号分子在子痫前期氧化应激发病机制中的研究

摘要

目的：检测正常足月妊娠及子痫前期孕妇胎盘组织C/EBPβ和β-catenin蛋白的定位及表达；采用缺氧/复氧模型体外模拟胎盘氧化应激损伤，研究C/EBPβ和β-catenin在调控人滋养细胞迁移和侵袭中的作用；探讨C/EBPβ是否介导β-catenin信号分子在子痫前期氧化应激发病机制中的作用，为后者的早期诊断和治疗提供借鉴。
　　方法：（1）选择2013年3月至2014年3月在我校附一院产科住院分娩的22例子痫前期孕妇为研究对象，另以20例正常足月妊娠孕妇设对照组，收集两组孕妇胎盘组织。免疫组化SP法定位各组胎盘组织中C/EBPβ和β-catenin蛋白，蛋白印迹法（Western Blotting，WB）检测各组胎盘组织中C/EBPβ和β-catenin蛋白的表达水平。（2）通过shRNA慢病毒转染质粒干扰早孕期绒毛外植体和HTR8/SVneo细胞株的C/EBPβ基因表达，通过氯化锂激活β-catenin信号分子；同时，对早孕期绒毛组织和HTR8/SVneo细胞株进行缺氧/复氧培养。Transwell侵袭实验检测阻断C/EBPβ和激活β-catenin对HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响。绒毛外植体培养实验评估阻断 C/EBPβ和激活β-catenin对绒毛外滋养细胞外生性迁移的影响。（3）WB法检测各组HTR8/SVneo细胞中 C/EBPβ、β-catenin、MMPs和 TIMPs蛋白的表达情况，观察C/EBPβ→β-catenin→MMPs、TIMPs在氧化应激中的变化；同时，检测各组 HTR8/SVneo细胞内氧化应激指标 ROS蓄积量；进一步明确C/EBPβ介导β-catenin信号分子在子痫前期氧化应激发病机制中的作用。
　　结果：（1）正常足月妊娠组及子痫前期组胎盘组织中均有C/EBPβ和β-catenin蛋白表达。C/EBPβ主要定位于合体滋养细胞的细胞核。β-catenin主要定位于合体滋养细胞细胞核，在细胞质中亦有少量表达。子痫前期组胎盘组织中 C/EBPβ、β-catenin蛋白表达水平分别为(0.47±0.01)、（0.27±0.05），分别与对照组（0.25±0.02）、（0.55±0.07）比较，差异有统计学意义（P<0.01）。（2）缺氧/复氧可导致绒毛外滋养细胞侵袭迁移力下降，而敲减C/EBPβ表达或激活β-catenin信号分子可以改善受损的绒毛外滋养细胞侵袭迁移能力。（3）缺氧/复氧可导致HTR8/SVneo细胞中C/EBPβ表达上调，降低β-catenin表达及抑制MMP-2/9、活化TIMP-1/2；敲减C/EBPβ表达，可上调β-catenin表达，同时活化 MMP-2/9和抑制 TIMP-1/2；激活β-catenin信号分子，对C/EBPβ无影响，但仍可活化 MMP-2/9和抑制 TIMP-1/2。（4）缺氧/复氧可增加细胞内氧化应激损伤，敲减C/EBPβ的表达或β-catenin激活可以有效抑制ROS的蓄积。
　　结论：在子痫前期胎盘组织中，C/EBPβ表达水平升高可通过调控Wnt/β-catenin信号通路而影响MMP-2/9及TIMP-1/2的活性水平，减弱滋养细胞的侵袭力，从而调控子痫前期的氧化应激发病机制。

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封面

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

参考文献

第一部分 子痫前期患者胎盘组织中C/EBPβ与β-catenin的表达及临床意义

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 讨 论

5 小 结

参考文献

第二部分 敲减C/EBPβ与激活β-catenin对氧化应激模型中滋养细胞侵袭功能的影响

1 实验材料

2 实验方法

3实验结果

4 讨 论

5 小 结

参考文献

第三部分 C/EBPβ介导β-catenin信号分子对缺氧/复氧致HTR8/SVneo生物学功能损伤的意义

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4 讨 论

5小 结

参考文献

文献综述:信号通路与子痫前期

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文