TCF3对非小细胞肺癌A549细胞株生长和迁移的影响

摘要

目的：探讨TCF3（Tcell factor3）基因敲低对A549细胞的Wnt通路转录活性，细胞生长和迁移的影响。
　　方法：通过转染SiRNA将A549细胞中的TCF3基因敲低作为实验组，同时设立仅常规培养的空白对照组和转染阴性SiRNA的阴性对照组。通过实时荧光定量PCR及Western blot明确3组细胞中TCF3的mRNA和蛋白表达量，通过TOPFlash/FOPFlash信号通路报告载体测定细胞Wnt通路转录活性，CCK-8检测A549细胞生长活力，流式细胞学技术分析A549细胞周期与细胞调亡情况，Transwell测定A549细胞迁移能力。
　　结果：与空白对照组和阴性对照组比较，实验组A549细胞TCF3的mRNA（0.17±0.02 VS1.00±0.00，P=0.00；0.17±0.02 VS1.00±0.17，P=0.00）和蛋白水平（0.03±0.01 VS0.15±0.02，P=0.00；0.03±0.01 VS0.15±0.02，P=0.00）显著降低；TOPflash/FOPflash报告基因的比值降低（5.20±0.60 VS10.30±0.90，P=0.00；5.20±0.60 VS10.70±0.40，P=0.00）;Wnt靶基因C-myc的蛋白表达量下降（0.27±0.02 VS0.75±0.04，P=0.00；0.27±0.02 VS0.74±0.04，P=0.00）；细胞的增殖活性降低，细胞凋亡率增加（29.77±1.52 VS14.59±1.99，P=0.00；29.77±1.52 VS15.33±1.97，P=0.00），细胞周期比例发生变化，G0/G1期细胞增多（71.98±0.51 VS59.20±2.55，P=0.01；71.98±0.51 VS58.06±3.25，P=0.00），S期细胞减少（23.91±0.05 VS30.87±1.80，P=0.00；23.91±0.05 VS32.87±3.90，P=0.01）；细胞穿膜数目明显减少（36.00±4.00 VS68.70±4.20，P=0.00；36.00±4.00 VS67.00±8.70，P=0.00）。
　　结论：
　　1、敲低TCF3基因能引起A549细胞的Wnt通路转录活性明显降低，并使Wnt下游靶基因C-myc的表达下调，提示TCF3在非小细胞肺癌的Wnt通路中起转录激活的作用。
　　2、TCF3可能通过调控Wnt通路下游靶基因而影响肺癌细胞的生长及迁移能力。

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英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

1. 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞

1.1.2 实验试剂

1.1.3 主要仪器和耗材

1.2 方法

1.2.1 细胞转染和分组

1.2.2 实时荧光定量PCR法检测TCF3 mRNA表达水平

1.2.3 Western-blot检测TCF3及C-myc的蛋白表达情况

1.2.4 TOPFlash/FOPFlash信号通路报告载体测定Wnt通路转录活性

1.2.5 CCK-8检测细胞的增殖

1.2.6 流式细胞学技术测定细胞周期以及凋亡

1.2.7 Transwell实验检测细胞迁移

1.3 统计学分析

2. 结果

2.1 A549细胞中TCF3 的mRNA及蛋白表达情况

2.2 A549细胞Wnt通路的转录活性及Wnt靶基因C-myc的蛋白表达水平

2.3 A549细胞增殖活性的检测

2.4 流式细胞仪检测A549细胞的凋亡水平及细胞周期

2.5 A549细胞的迁移能力检测

3. 讨论

全文总结

参考文献

文献综述:Wnt信号通路与非小细胞肺癌的形成以及治疗

致谢

攻读硕士学位期间发表论文