siRNA介导Nestin基因沉默对食管癌ECA109细胞侵袭迁移的影响及其机制

摘要

目的：探讨巢蛋白（Nestin）对食管鳞癌ECA109细胞的侵袭与迁移能力的影响及可能的分子机制。
　　方法：分通过靶向沉默食管癌ECA109细胞内源性Nestin基因后，采用Real-time PCR和Western blot分别检测Nestin基因的干扰效率及细胞内MMP2，MMP9，VEGF及β-catenin的表达水平；Transwell实验验证食管癌细胞迁移、侵袭能力的变化。
　　结果：受与contorl-siRNA组相比，Nestin-siRNA组中Nestin mRNA和蛋白水平明显降低；明显扼制了食管癌细胞迁移、侵袭能力;MMP2， MMP9及VEGF表达明显降低；细胞总β-catenin及核内β-catenin表达明显减少。
　　结论：Nestin与食管癌侵袭迁移能力密切相关，下调Nestin表达可明显抑制食管癌细胞ECA109的侵袭迁移能力，其机制可能与抑制β-catenin的核内转移与下调MMP2，MMP9及VEGF的表达有关。

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前言

1 实验材料

1.1 主要试剂

1.2 细胞

1.3 siRNA的合成

2 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 Ecal109细胞瞬时转染

2.3 Real-time PCR法

2.4 Western-blot法

2.5 Transwell侵袭试验

2.6 Transwell迁移试验

2.7 统计学处理

3 结果

3.1 ECa109细胞中Nestin干扰效率的验证

3.2 Transwell实验验证沉默Nestin表达对ECA109细胞侵袭能力的作用结果显示

3.3 Transwell实验检测沉默Nestin表达对ECA109细胞迁移能力的作用效力显示

3.4 沉默Nestin表达对食管癌ECA109细胞内金属蛋白酶MMP2， MMP9水平表达的影响结果显示

3.5 沉默Nestin表达对食管癌ECA109细胞血管内皮生长因子VEGF水平表达的影响结果显示

3.6 沉默Nestin表达对食管癌ECA109细胞总β-catenin及细胞核β-catenin蛋白水平表达的影响Western blot检测结果显示

4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述:巢蛋白对肿瘤细胞及肿瘤血管生成的影响

致谢

硕士期间发表的论文