HA117对先天性肠无神经节细胞症发病影响的探讨

摘要

第一节神经发育相关基因DPF3、Smarcd3及MEF2在先天性肠无神经节细胞症患儿肠道组织内的表达情况
　　目的：通过对DPF3、Smarcd3及MEF2基因在先天性肠无神经节细胞症（HD）患儿肠道组织内的检测，验证DPF3、Smarcd3及MEF2基因在肠道组织内的表达情况，并探讨DPF3、Smarcd3及MEF2基因在HD发病过程中的可能作用。
　　方法：随机选取28例重庆医科大学附属儿童医院HD患儿手术标本，并根据手术标本取材的位置分为：痉挛段组和吻合口组。利用RealTime-PCR、免疫蛋白印迹法及免疫组织化学染色法从RNA和蛋白水平对DPF3、Smarcd3及MEF2基因在HD患儿肠道组织内的表达进行检测，验证DPF3、Smarcd3及MEF2在肠道组织内的表达，并分析其参与HD发病过程的可能机制。其中，利用BIO-RAD对mRNA数据半定量分析；GeneSnap系统及软件对蛋白数据进行分析；免疫组织化学法及光学显微镜数码摄片进行蛋白染色分析；GraphPad Prism5绘图，SPSS（version17.0）进行数据统计。
　　结果：DPF3 mRNA在患儿吻合口和痉挛段的表达为1.76±1.30和1.07±0.93；蛋白的表达分别为2.31±0.62和1.95±0.57。Smarcd3 mRNA在患儿吻合口和痉挛段的表达为0.68±0.62和0.38±0.42；蛋白的表达分别为0.85±0.43和0.61±0.34；MEF2 mRNA在患儿吻合口和痉挛段的表达为1.01±0.63和0.68±0.39；蛋白的表达分别为2.29±0.38和1.83±0.76。DPF3、Smarcd3及MEF2 mRNA及蛋白在患儿痉挛段的表达较吻合口均降低（P<0.05），且趋势相一致。DPF3、Smarcd3及MEF2在吻合口神经节细胞处可见阳性的棕色颗粒状染色，而在痉挛段未见明显染色。
　　结论：神经发育相关基因DPF3、Smarcd3及MEF2可能参与HD的发病过程。
　　第二节293T细胞内分化相关基因HA117对神经发育相关基因的调控
　　目的：通过对感染HA117过表达慢病毒的293T细胞内神经发育相关基因DPF3、Smarcd3及MEF2表达的检测，探讨HA117与神经发育相关基因的关系。
　　方法：利用HA117过表达慢病毒转染293T细胞。利用Real-Time、免疫蛋白印迹法等技术，从RNA水平上检测HA117在293T细胞转染前后的表达以及神经发育相关基因 DPF3、Smarcd3和 MEF2在293T细胞转染前后RNA和蛋白水平的表达。其中，利用BIO-RAD对mRNA数据半定量分析；Genesnap系统及软件对蛋白数据进行分析；GraphPad Prism5绘图，SPSS（version17.0）进行数据统计。
　　结果：HA117 RNA在293T、293T/Vector及293T/HA117内的表达分别为0.020±0.003、0.027±0.031、1.116±0.372；DPF3 mRNA在293T、293T/Vector及293T/HA117内的表达分别为1.653±0.187、1.527±0.185、0.984±0.276；Smarcd3 mRNA在293T、293T/Vector及293T/HA117内的表达分别为1.653±0.156、1.013±0.161、0.532±0.134；MEF2 mRNA在293T、293T/Vector及293T/HA117内的表达分别为0.821±0.258、1.677±0.779、0.875±0.384.HA117转染293T细胞后表达明显增高（P<0.05）;DPF3、Smarcd3在293T细胞内的表达均较其在转染HA117过表达慢病毒的293T细胞内的表达明显降低（P<0.05）；MEF2 mRNA在293T/HA117细胞内的表达较293T/Vector内的表达明显降低（P<0.05），与293T细胞内的表达没有明显差别（P>0.05）。HA117与神经发育相关基因在293T及293T/HA117细胞内的表达趋势相反。
　　结论：HA117慢病毒转染293T细胞有效，转染HA117过表达慢病毒的293T细胞内 HA117表达明显增高（P<0.05）。同时，在293T细胞转染 HA117过表达慢病毒后神经发育相关基因 DPF3、Smarcd3及MEF2的表达明显降低(P<0.05)。证明HA117对神经发育相关基因的表达具有明显的抑制作用，可能是HA117参与HD发病的潜在机制。

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前言

第一节 神经发育相关基因DPF3、Smarcd3及MEF2在先天性肠无神经节细胞症患儿肠道组织内的表达情况

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

第二节 在293T细胞内HA117对神经发育相关基因表达的调控

1材料与方法

2结果

3讨论

4结论

参考文献

全文总结

文献综述: 先天性肠无神经节细胞症的发病与遗传及环境

致谢

硕士期间发表论文