无镁诱导神经元惊厥样放电后Lingo-1对轴突的影响

摘要

第一部分：无镁诱导神经元惊厥样放电后对神经元轴突及Lingo-1表达的影响
　　目的：研究无镁诱导神经元放电后，神经元轴突的形态变化及Lingo-1的表达情况。
　　方法：以培养10d的皮层神经元为研究对象，根据是否经正常细胞外液或无镁细胞外液处理3h，分为正常组和无镁组。应用膜片钳全细胞模式记录两组神经元动作电位发放情况；免疫荧光技术标记神经元特异性神经丝蛋白200（Neurofilament protein，NF200）检测培养神经元的纯度及两组神经元轴突变化；以上两种不同处理后6h、12h、24h、48h及72h五个时间点提取 RNA及全蛋白，采用Q-PCR及Western-blot检测两组相应时间点神经元中Lingo-1表达情况。
　　结果：
　　（1）无镁组神经元放电形式是强直性放电，动作电位发放频率明显高于正常组（P＜0.05）。
　　（2）正常组神经元轴突粗壮、轴突间网络连接较致密，NF200只在突起表达；无镁组神经元轴突纤细、轴突间网络连接稀疏，NF200在胞体内高表达。
　　（3）各观察时间点上，无镁组Lingo-1的表达量均高于正常组（P＜0.05）。
　　结论：无镁处理后可成功建立惊厥样细胞模型，无镁处理后有神经元轴突损伤及Lingo-1表达升高。
　　第二部分：无镁诱导神经元惊厥样放电后Lingo-1表达升高与轴突损伤的关系
　　目的：研究惊厥样神经元放电后Lingo-1表达升高与轴突损伤的关系。
　　方法：
　　（1）设计shRNA慢病毒抑制神经元Lingo-1表达，并以不针对任何基因的shRNA序列作为对照，分为正常组、对照shRNA组和Lingo-1 shRNA组，采用Western-blot检测三组Lingo-1表达量。
　　（2）设计shRNA慢病毒抑制Lingo-1表达，并以不针对任何基因的shRNA序列作为对照，分为正常组、无镁组、无镁+对照 shRNA组、无镁+Lingo-1 shRNA组4组，用免疫荧光技术检测神经元轴突长度。
　　结果：
　　（1）神经元中Lingo-1表达量：正常组与对照shRNA组无统计学差异，Lingo-1 shRNA组明显低于对照shRNA组。
　　（2）轴突长度：无镁组小于正常组（P=0.000），无镁+对照 shRNA组与无镁组无统计学差异，无镁+Lingo-1 shRNA组大于无镁+对照 shRNA组（P=0.000）。
　　结论：慢病毒介导的Lingo-1 shRNA可成功抑制Lingo-1的表达，降低Lingo-1表达后神经元轴突损伤减轻，说明Lingo-1可能参与神经元放电后神经元轴突损伤。

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前言

第一部分：无镁诱导神经元惊厥样放电后对神经元轴突及Lingo-1表达的影响

1 材料与方法

2结果

3 讨论

小结：

第二部分：无镁诱导神经元惊厥样放电后Lingo-1表达升高与轴突损伤的关系

1材料与方法

2 结果

3讨论

小结：

全文总结

参考文献

文献综述: Lingo-1在中枢神经系统疾病中的研究进展

致谢

攻读硕士学位期间发表文章和学术活动