Dynamin1的磷酸化状态与癫痫发作的相关性研究

摘要

目的:Dynamin1是一种与癫痫有关的内吞相关蛋白。当神经元活性增高发生高频放电时，它可以被去磷酸化并介导一种大容量的突触囊泡内吞模式，以适应陡然增高的突触传递压力，调节突触囊泡循环。本研究旨在探讨不同浓度的抑制剂和激动剂干预 dynmain1是否会影响锂-匹鲁卡品诱导的在体大鼠癫痫发作及4-氨基吡啶（4-AP）诱导的离体脑片动作电位（AP）的连续爆发，进一步明确急性癫痫发作后各实验组大鼠海马中dynamin1及磷酸化dynamin1蛋白表达水平，以探究不同磷酸化状态的 dynamin1与癫痫发作的关系。
　　方法:本项研究通过侧脑室注射 dynamin1抑制剂 dynasore（不同浓度）和激动剂磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），观察锂-匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫发作模型的行为学变化。采用western blot检测各实验大鼠海马组织中 dynamin1蛋白及磷酸化 dynamin1蛋白表达水平。采用全细胞膜片钳技术研究 dynasore（不同浓度）和 PIP2对4-AP诱发的大鼠离体脑片持续爆发的动作电位的影响。
　　结果:研究发现在匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫发作模型中,100及160μM（中浓度）的 dynasore能有效抑制大鼠的癫痫发作：发作率降低，发作潜伏期延长，发作的严重程度减轻；PIP2对大鼠癫痫发作率和潜伏期无影响，但能加重癫痫发作的严重程度。Dynasore能使癫痫发作后大鼠海马中 dynamin1磷酸化水平升高，也以中浓度组升高最明显；但PIP2组海马中 dynamin1的磷酸化水平却无明显改变。研究还发现用4-AP诱导大鼠海马脑片CA1区椎体神经元出现持续爆发的动作电位后，浓度为10及20μM（中浓度）的 dynasore能明显减少动作电位频率；但PIP2对动作电位频率无影响。
　　结论:我们的研究发现中浓度 dynamin1抑制剂 dynasore能抑制体内匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫发作（100、160μM），和体外4-AP诱发的脑片动作电位的持续爆发（10、20μM），激动剂 PIP2能加重大鼠癫痫发作严重程度。100、160μM（中浓度）的 dynasore还可升高急性癫痫发作后大鼠脑组织内磷酸化 dynamin1蛋白水平而不是总的dynamin1蛋白水平。然而激动剂 PIP2的使用却未能对 dynamin1的表达产生影响。这些结果表明 dynamin1的磷酸化状态与癫痫发作密切相关，一定范围内抑制dynamin1的活性可能改变其磷酸化和去磷酸化蛋白的表达水平，进而影响突触囊泡内吞，导致神经元兴奋性改变，最终调节癫痫发作的进程。

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前言

1 材料与方法

25 结果

29 讨论

全文总结

参考文献

附图

文献综述: Dynamin 在突触传递中的作用及其与疾病的关系

致谢

硕士期间发表的论文